Микробиологические аспекты лекарственных растительных препаратов и традиционных лекарственных растительных препаратов

Микробиологические аспекты лекарственных растительных препаратов и традиционных лекарственных растительных препаратов

Содержание

1. Введение

2. Обсуждение

2.1. Минимизация микробной контаминации путем предотвращения

2.1.1. Лекарственное растительное сырье

2.1.2. Растительные фармацевтические субстанции

2.1.3. Лекарственные растительные препараты

2.2. Методы сокращения микробной контаминации

2.2.1. Обоснование применения процесса деконтаминации

2.2.2. Выбор метода деконтаминации

2.2.3. Лекарственное растительное сырье

2.2.4. Растительные фармацевтические субстанции

2.2.5. Лекарственные растительные препараты

2.3. Испытания лекарственного растительного сырья, растительных фармацевтических
субстанций и лекарственных растительных препаратов

2.3.1. Лекарственное растительное сырье

2.3.2. Растительные фармацевтические субстанции

2.3.3. Лекарственное растительное сырье

3. Заключение

4. Определения

5. Список литературы

1. Введение

Директива 2001/83/EC в действующей редакции и Директива 2001/82/EC в действующей редакции содержат определения терминов «лекарственное растительное сырье», «растительная фармацевтическая субстанция» и «лекарственный растительный препарат» (ЛРП)¹. Базовые законодательные нормы распространяются на лекарственные растительные препараты для медицинского применения, а также для применения в ветеринарии². Согласно Директиве 2004/24/EC дополнительная упрощенная процедура регистрации была установлена для традиционных лекарственных растительных препаратов (ТЛРП) для медицинского применения. Принципы, изложенные в настоящей пояснительной записке, в равной степени применимы к ТЛРП.

Согласно данным определениям, лекарственный растительный препарат – это любой лекарственный препарат, содержащий в качестве действующего вещества один или несколько видов исключительно лекарственного растительного сырья, или одну или несколько растительных фармацевтических субстанций, или один или несколько видов лекарственного растительного сырья в комбинации с одной или несколькими растительными фармацевтическими субстанциями.

В состав ТЛРП также могут входить витамины и минералы, если они служат в качестве вспомогательных компонентов для действующих веществ растительного происхождения.

ЛРП обладают рядом характеристик, отличающих их от лекарственных препаратов, содержащих действующие вещества с определенным химическим составом. В связи с этим были разработаны специальные руководства для ЛРП, в которых затрагиваются отдельные аспекты, отсутствующие в общих руководствах. Лекарственное растительное сырье и растительные фармацевтические субстанции представляют собой сложные смеси природных компонентов, которые могут содержать загрязняющие примеси в разных естественных пропорциях. Поскольку лекарственное растительное сырье имеет природное происхождение, в целом, уровень его микробной обсемененности выше, чем у химически синтезированных ЛРП.

В настоящей пояснительной записке рассматривается вопрос достижения надлежащей микробиологической чистоты лекарственного растительного сырья, растительных фармацевтических субстанции и ЛРП с помощью предупреждающих действий, производственных процессов или применения технологий деконтаминации. Целью настоящей пояснительной записки является обзорное представление критических аспектов, которые необходимо учитывать для обеспечения микробиологической чистоты в надлежащей степени. Основное внимание уделяется действующим нормативным аспектам, но также затрагиваются положения GACP и GMP.

Методы стерилизации и микробиологическая чистота лекарственного растительного сырья, растительных фармацевтических субстанций и лекарственных растительных препаратов для стерильных лекарственных форм не затрагиваются в настоящем документе.

2. Обсуждение

Действующими веществами в ЛРП является лекарственное растительное сырье и/или растительные фармацевтические субстанции, полученные из лекарственного растительного сырья. Поскольку действующие вещества в ЛРП имеют природное происхождение, как правило, уровень их микробной контаминации (бионагрузки) выше, чем у действующих веществ с определенным химическим составом, и микробная популяция может отличаться количественно и качественно. В связи с этим необходимо уделять особое внимание микробиологической чистоте ЛРП. Европейская Фармакопея признает необходимость утверждения более широких критериев приемлемости в отношении микробиологической чистоты ЛРП в зависимости от сырья препарата и метода его обработки, например, лекарственных сборов.

Лекарственное растительное сырье или растительные фармацевтические субстанции могут быть контаминированы множеством видов бактерий и грибов (дрожжевых и плесневых). Контаминация вирусами, как правило, не рассматривается как представляющая опасность в отношении лекарственного растительного сырья или растительных фармацевтических субстанций. Необходимо определять и ограничивать количество жизнеспособных бактерий, грибов и их спор в лекарственном растительном сырье, растительных фармацевтических субстанциях и ЛРП в соответствии с требованиями Европейской Фармакопеи.

Патогенные микроорганизмы

Патогенные виды бактерий представляют риск, поскольку могут вызывать инфекционные заболевания или другие нежелательные эффекты у пациентов, принимающих ЛРП. Такие микроорганизмы не должны присутствовать в ЛРП.

Споры

Эндоспоры – это бактериальные споры, которые образуют определенные виды грамположительных бактерий, например, виды Bacillus и Clostridium. Споры образуются, когда бактерии попадают в неблагоприятные условия окружающей среды (высокие температуры, засуха, радиация или истощение питательного субстрата). Как правило, в высушенном лекарственном растительном сырье обнаруживается более высокое содержание спор, чем в свежем сырье, особенно при применении ненадлежащих процедур высушивания. Бактериальные споры имеют высокую устойчивость к различным средам (десикации, заморозке, сухому жару, выпариванию, повышенному давлению, УФ-радиации и различным химическим веществам, включая растворители, такие как этанол). Бактериальные споры могут прорастать и превращаться в вегетативные клетки – живые бактерии – при изменении условий среды на благоприятные. В инкубационной фазе испытания на общее количество аэробных микроорганизмов (Евр. Фарм. 2.6.12, 2.6.13, 2.6.31) в препарате используют питательный субстрат и устанавливают повышенные температуры, что позволяет определить споры бактерий отдельных видов (преимущественно аэробных видов Bacillus), а также сами бактерии количественными методами in vitro.

Грибы, в особенности плесневые, также образуют споры (конидии). Однако они, как правило, менее устойчивы к неблагоприятным условиям окружающей среды, чем бактериальные споры.

Физико-химические характеристики

Некоторые микроорганизмы могут изменять физико-химические свойства растительного препарата, что может негативно сказаться на его качестве. Микроорганизмы могут осуществлять метаболизм компонентов растительного сырья, что ведет к нежелательным изменениям в его химическом составе.

Микроорганизмы также могут приводить к изменениям внешних свойств (внешнего вида, запаха или вкуса), а также изменению кислотности ЛРП за счет продуктов их метаболизма. При существенном изменении уровня кислотности ЛРП, содержащего химически ионизируемый консервант, эффективность действия которого зависит от кислотности (например, бензойную кислоту и сорбиновую кислоту), она может быть снижена.

Необходимо принимать во внимание вышеприведенные риски.

Микотоксины

В процессе мицелиального роста на субстратах некоторые виды плесени продуцируют микотоксины. Данные вещества представляют собой вторичные метаболиты с липофильными (например, афлатоксины и охратоксин А) или гидрофильными (например, фумонизины) свойствами. Микотоксины могут образовываться в процессе роста растения (культивации или в природе) или при хранении лекарственного растительного сырья, растительной фармацевтической субстанции или ЛРП.

Наиболее значимыми микотоксинами являются высокотоксичные и онкогенные афлатоксины. Афлатоксин B1 считается наиболее токсичным микотоксином.

Как правило, афлатоксины продуцируют только отдельные виды грибов, поражающие определенные виды растений, части растений и предпочитающие определенные условия роста. Географическое происхождение растения может существенно влиять на количество образующихся афлатоксинов, поскольку плесневые грибки, которые продуцируют афлатоксины, предпочитают повышенные температуры и влажные условия среды. Как правило, лекарственное растительное сырье, полученное от растений, произрастающих в (суб)тропических регионах, может содержать значительно более высокие уровни афлатоксинов, чем сырье растений, произрастающих в более прохладных и сухих климатических условиях.

Основными организмами, продуцирующими афлатоксины, являются Aspergillus flavus и Aspergillus parasiticus. В целом, все части растения подвержены риску контаминации афлатоксинами. Семена, плоды, корни и корневища подвержены наибольшему риску, поскольку содержат наиболее питательную среду для роста грибов. Кроме того, грибы Aspergillus flavus и Aspergillus parasiticus передаются через почву, что представляет дополнительный риск для корней и корневищ. Присутствие влаги является основным условием роста микроорганизмов и образования афлатоксинов, поэтому влажность является критическим параметром, и испытания на потери в массе при высушивании или влажность исключительно важны для высушенного лекарственного растительного сырья, растительных фармацевтических субстанций и ЛРП.

Некоторые виды растительного сырья (например, корень солодки) могут быть контаминированы охратоксином А. Данный токсин продуцируют грибы Aspergillus ochraceus, Penicillium verrucosum и некоторые другие виды Aspergillus и Penicillium. Охратоксин А имеет нефротоксическое и онкогенно действие.

Афлатоксины и охратоксины А устойчивы к нагреванию и растворимы в водно-спиртовых растворах. В связи с этим существует потенциальный риск переноса афлатоксинов и охратоксинов А из лекарственного растительного сырья в растительную фармацевтическую субстанцию или ЛРП, что может привести к высоким концентрациям афлатоксинов в растительной фармацевтической субстанции или ЛРП.

2.1. Минимизация микробной контаминации путем предотвращения

Микробная контаминация может быть как первичной, так и вторичной. Первичная контаминация представляет собой естественную микробную флору собираемого растительного сырья. Вторичная контаминация происходит в процессе обработки сырья (за счет контакта с человеком, оборудованием, размещения в помещениях, действия систем вентиляции воздуха, а также контаминация в процессе перевозки). Минимизации контаминации микроорганизмами и микробными токсинами в идеале можно добиться путем мониторинга и ограничения вероятности первичной и вторичной контаминации, то есть предпочтительно путём предотвращения, а не с помощью методов деконтаминации.

В соответствии с законодательством ЕС, лекарственное растительное сырье производится с соблюдением надлежащей практики культивирования и сбора лекарственных растений (GACP). С момента получения из сырья растительные фармацевтические субстанции производятся в соответствии с надлежащей производственной практикой (GMP), как это прописано в директивах ЕС по GMP (см. таблицу в Приложении 7 к GMP часть I и таблицу 1 к GMP часть II). Некоторые виды лекарственного растительного сырья и растительных фармацевтических субстанций (например, определенные эфирные масла) обладают собственным в некоторой степени противомикробным действием. Однако этот факт не должен служить аргументом несоблюдения положений GACP и GMP.

Более подробная информация по данной теме приводится также в Пояснительной записке по качеству эфирных масел в виде действующих веществ в ЛРП/ТЛРП EMA/HPMC/84789/2013 и Ответах на вопросы по качеству ЛРП/ТЛРП EMA/HPMC/41500/2010 в действующей редакции.

2.1.1. Лекарственное растительное сырье

Что касается культивируемых растений, с целью предотвращения микробной контаминации необходимо выбирать определенные условия выращивания. Например, если в качестве удобрения используется навоз, перед применением его необходимо должным образом компостировать. В связи с тем, что многие микроорганизмы являются специфическими по хозяину, нельзя использовать в качестве удобрения экскременты человека, а также следует избегать непосредственного использования сточных вод.

При необходимости возможно использование фунгицидов в процессе выращивания растения с целью минимизации роста грибов. Как для культивируемых, так и для некультивируемых растений необходимо выбирать время сбора таким образом, чтобы присутствие внешней влаги на растениях было минимальным, то есть избегать сбора растений во время или сразу после дождя или обильной утренней/вечерней росы. Выращивание растений в теплицах позволяет в некоторой степени контролировать контаминацию микроорганизмами, переносящимися по воздуху или животными.

После сбора лекарственное растительное сырье, не требующее заморозки, предназначенное для использования в свежем виде, должно быть немедленно обработано. Если растительное сырье необходимо высушить перед применением, должен быть описан процесс сушки (метод и длительность). Сушка должна быть как можно более быстрой и равномерной, поскольку данный этап является критическим для роста плесневых грибов и бактерий и образования микотоксинов. Недостаточное высушивание, ведущее к увеличению уровня микробной контаминации, не должно устраняться исключительно методами деконтаминации продукции.

Если очистка лекарственного растительного сырья осуществляется путем промывания водой, ее качество также должно учитываться как возможный риск микробной контаминации.

При выборе материалов упаковки и условий хранения лекарственного растительного сырья следует учитывать необходимость предотвращения микробного роста и вторичной контаминации. Хранение при низких температурах может привести к образованию конденсата, что представляет собой риск контаминации.

2.1.2. Растительные фармацевтические субстанции

Принципы быстрой, эффективной и равномерной обработки в процессе производства лекарственного растительного сырья должны также применяться к растительным фармацевтическим субстанциям. Важными этапами и контролируемыми характеристиками в процессе являются температура и время экстракций, в особенности для водных экстрактов, вакуумное испарение экстрактов, дистилляция эфирных масел и время выдержки. Отжатые соки и экстракты лекарственных трав, приготавливаемые с водой или со спиртом в низких концентрациях особенно сильно подвержены риску микробной контаминации. Добавление консервантов к экстрактам и отжатым сокам может рассматриваться как решение данной проблемы. Однако выбор консерванта и его концентрации должен быть в полной мере обоснован в соответствии с действующими директивами, среди которых должна быть документация, доказательно подтверждающая эффективность консерванта.

Помимо микробной контаминации, источником которой является само лекарственное растительное сырье, также необходимо контролировать микробную контаминацию, причиной которой может быть вода, экстрагенты, вспомогательные вещества для стандартизации или технологических целей, поскольку она является частью общей микробиологической контаминации растительной фармацевтической субстанции.

При выборе материалов упаковки и условий хранения растительной фармацевтической субстанции следует учитывать необходимость предотвращения микробного роста и вторичной контаминации.

2.1.3. Лекарственные растительные препараты

Принципы предотвращения микробной контаминации лекарственного растительного сырья и растительных фармацевтических субстанций распространяются также на производство, транспортировку и хранение ЛРП.

Микробиологическая чистота вспомогательных веществ, используемых для производства определенных лекарственных форм, должна контролироваться в соответствии с Европейской Фармакопеей и директивами ЕС.

2.2. Методы сокращения микробной контаминации

Как описано выше, микробиологическая чистота ЛРП является результатом качества материалов, использованных в процессе производства. Согласно критериям GMP, заключение о надлежащем качестве не может быть сделано только по завершении производственного процесса, оно должно отслеживаться на всех этапах, включая изначальное качество сырья.

Минимизация микробной обсемененности сырья для растительных препаратов на этапах культивации, сбора, хранения и обработки является исключительно важным аспектом, поскольку возможность сокращения микробной бионагрузки материалов растительного происхождения путем последующей обработки очень ограничена. Это связано с тем, что материалы растительного происхождения подвержены ухудшению качества под действием многих доступных способов обработки, но при этом проблема сохранения опасных остаточных продуктов должна быть полностью решена.

Данная тема приводится в фармакопейной статье Европейской Фармакопеи «Материалы растительного происхождения», в которой в пункте касаемо производства приводится следующее: «При использовании процедуры деконтаминации необходимо подтвердить, что качество каких-либо компонентов растения не было затронуто, и какие-либо опасные остаточные продукты отсутствуют».

Несмотря на эффективность оксида этилена в сокращении бионагрузки (включая эндоспоры), его использование для контаминации лекарственного растительного сырья запрещено в ЕС с 31 декабря 1989 г. Директивой 89/365/EEC в связи с образованием токсичных побочных продуктов, таких как этиленхлоргидрин и этиленгликоль.

2.2.1. Обоснование применения процесса деконтаминации

Полное уничтожение всех микроорганизмов в отдельно взятом лекарственном растительном сырье, растительной фармацевтической субстанции или ЛРП методами стерилизации не является необходимым, если патогенные микроорганизмы отсутствуют в готовом лекарственном препарате.

Данные о микробиологической чистоте лекарственного препарата должны быть предоставлены для подтверждения необходимости проведения процедуры деконтаминации и внедрения процедуры по сокращению микробной контаминации. Оценку рисков должен проводить производитель растительной фармацевтической субстанции или готового лекарственного препарата на основании данных о микробной популяции и изначальном уровне контаминации, учитывая рекомендованные критерии приемлемости для нестерильных фармацевтических препаратов: общее количество аэробных микроорганизмов и общее количество грибов (дрожжевых/плесневых), как они определяются в Европейской Фармакопее.

Выбор процедуры деконтаминации и ее обоснованность должны полностью зависеть от типа и состава материала растительного происхождения, его предполагаемого использования и пути введения. Важно также учитывать изначальную микробную бионагрузку и желаемый максимальный итоговый уровень содержания микроорганизмов и принимать во внимание последующие этапы производственного процесса и факторы, которые могут влиять на микробный рост, такие как активность воды и предполагаемые срок и условия хранения.

Недопустимо использование процедур деконтаминации взамен соблюдения положений GACP или GMP или для маскирования низкой микробиологической чистоты необработанного лекарственного растительного сырья или растительной фармацевтической субстанции. Необходимо исследовать растительные материалы на присутствие патогенных бактерий и предпринимать меры по их устранению или контролю. Микроорганизмы, способные продуцировать токсины, такие как Clostridium botulinum или грибы, безвредны, если находятся в непригодных для роста условиях, однако, если токсины образовались, удалить их очень сложно. В связи с этим необходимо тщательно проверять растительные материалы на возможное присутствие микробных метаболитов, поскольку большинство методов микробной деконтаминации позволяют сократить количество жизнеспособных организмов (общее количество аэробных микроорганизмов или грибов), но не снижают уровни содержания микотоксинов или эндотоксинов. Кроме того, лишь отдельные виды деконтаминации позволяют сократить количество спор.

Качество деконтаминированного лекарственного растительного сырья/растительной фармацевтической субстанции/ЛРП существенно зависит от условий хранения и транспортировки, что связано с ростом бактерий, выживших после процесса деконтаминации, и химическими реакциями, такими как окисление и биохимические изменения химических компонентов материалов растительного происхождения.

При использовании метода деконтаминации в процессе разработки препарата необходимо продемонстрировать, что материал растительного происхождения не был существенно затронут в ходе процедуры, например, путем сравнения общего характера хроматограмм (метод отпечатков пальцев). Если в химическом профиле обнаруживаются существенные изменения, они должны быть рассмотрены и полностью обоснованы. Также должно быть принято во внимание данных изменений на безопасность и эффективность лекарственного растительного сырья/растительной фармацевтической субстанции/ЛРП.

2.2.2. Выбор метода деконтаминации

Существует ряд различных методов, используемых для сокращения микробной контаминации лекарственного растительного сырья, растительной фармацевтической субстанции или в процессе производства готового лекарственного препарата. При необходимости применения данных методов они должны быть использованы как можно раньше с целью поддержания микробиологической чистоты на надлежащем уровне на протяжении всего производственного процесса и минимизации роста микроорганизмов в процессе производства препарата и впоследствии.

Выбираемый метод деконтаминации должен быть максимально щадящим, чтобы не повлечь за собой нежелательные изменения в химическом составе и физических свойствах, влияющие на качество готового препарата. Выбор метода и определение параметров процесса (временных интервалов, температур, давления, концентраций, дозы и т.д.) должны основываться на данных, полученных в ходе разработки и валидации препарата.

Процесс экстракции

Во многих случаях непосредственно производственный процесс может в некоторой степени обеспечивать микробную деконтаминацию. Например, экстракция растительного сырья с помощью спиртового раствора может рассматриваться, как метод сокращения количества патогенных микроорганизмов. Более высокие концентрации этанола (от 60 до 95 %) дают бактерицидный и фунгицидный эффект в отношении вегетативных форм, однако некоторое консервирующее действие отмечается и при более низких концентрациях (выше примерно 20 %). Кроме концентрации этанола противомикробное действие также зависит от продолжительности воздействия, температуры и присутствующих штаммов микроорганизмов. Этанол неэффективен в отношении бактериальных спор.

Между этанолом и метанолом не выявлено каких-либо очевидных различий в эффективности микробной деконтаминации. Вегетативные клетки, особенно грамотрицательных видов очень чувствительны к нагреванию и спиртовым растворам. Остаточная микробная контаминация после подобных процессов экстракции представляет собой преимущественно бактериальные эндоспоры, устойчивые к воздействию, например, этанола. Водно-спиртовая экстракция с нагреванием, как правило, эффективна в отношении препаратов с общим количеством аэробных микроорганизмов менее 104 КОЕ/мл.

Производство сухого экстракта, как правило, включает этап тщательного выпаривания органического растворителя в вакуумном испарителе. В большинстве случаев получающийся густой экстракт, в котором остается некоторое количество влаги, смешивают с подходящими вспомогательными веществами, а затем еще раз выпаривают до высушивания с помощью соответствующего оборудования (например, распылительной или ленточной сушилки). После выпаривания спирта общее содержание микроорганизмов может увеличиться, поскольку содержащаяся в густом экстракте вода может спровоцировать микробный рост. Этот аспект необходимо принимать во внимание при разработке производственного процесса.

Согласно ряду исследований эффективности использования кипящей воды для приготовления лекарственных сборов экстракция кипящей водой позволяет сократить общее количество аэробных микроорганизмов и дрожжевых и плесневых грибов. Эксперименты с искусственной контаминацией неспорообразующими (E. coli, Staphylococcus aureus, Aeromonas hydrophila, Klebsiella pneumonia и Enterobacter cloaceae) и спорообразующими видами микроорганизмов (Bacillus cereus) показали, что неспорообразующие бактерии были полностью устранены, тогда как спорообразующие микроорганизмы сохранились после экстракции кипящей водой практически в полном объеме. Однако поскольку вода представляет собой идеальный субстрат для микроорганизмов, срок хранения бесконсервантных жидких/густых водных экстрактов не должен превышать 24 часа при температуре холодильника 2-8 °С. Прочие условия хранения должны быть обоснованы и подтверждены данными о стабильности.

Экстракция сверхкритическим диоксидом углерода позволяет сократить общее количество аэробных микроорганизмов и дрожжевых и плесневых грибов за счет сочетания действия растворителя с воздействием высокого давления, которые в равной степени сокращают уровень содержания микроорганизмов.

В процессе дистилляции эфирных масел микробная контаминация, как правило, очень низка, что связано с особенностями самого процесса (высокая температура и фазовый переход), и, кроме того, с присущими многим эфирным маслам противомикробными свойствами.

Обработка этанолом

Учитывая тот факт, что экстракция этанолом помогает уменьшить микробную контаминацию, для минимизации микробной обсемененности может проводиться многократная обработка экстрактов этанолом с последующим выпариванием.

Термическая обработка: сухожаровая и паровая

Для минимизации микробной контаминации перед высушиванием лекарственного растительного сырья/растительной фармацевтической субстанции/ЛРП при необходимости возможно проведение краткосрочной термической обработки (сверхвысокотемпературной или высокотемпературной) или пастеризации.

Однако подобная обработка, как правило, не применима к экстрактам с высоким содержанием смолистых веществ, высоковязким экстрактам (с сухим остатком свыше 50 %) или экстрактам с термолабильными или летучими компонентами.

Применение термической обработки в качестве метода микробной деконтаминации может ограничиваться максимальной допустимой температурой, в особенности при наличии в материале растительного происхождения термолабильных и летучих компонентов.

Сушка при высоких температурах в течение нескольких минут, например, в сушильных барабанах для промышленного производства, в целом, сокращает микробную бионагрузку. Сушка при более низких температурах в статичных сушилках в течение более длительного периода может оказывать меньшее влияние на отдельные химические компоненты, но и не так эффективна в сокращении количества жизнеспособных микроорганизмов, как сушильные барабаны, и не эффективна в отношении спор. Споры грамположительных бактерий очень устойчивы к нагреванию, и воздействие температур, требующихся для их уничтожения, может вести к физико-химическим, химическим и фиксируемым органами чувств изменениям лекарственного препарата.

Обработка водным паром при температуре 65 °С может уничтожить некоторые нежелательные виды микроорганизмов (например, Salmonellae, E. coli, Pseudomonas aeruginosa). Однако необходимо произвести удаление остаточной влаги после обработки и тщательно контролировать ее содержание во избежание микробного роста.

Фумигация

Фумигация лекарственного растительного сырья с целью контроля вредителей и заболеваний растений также может сокращать микробную контаминацию. Рекомендуется максимально ограничивать применение фумигантов и использовать их только в случае исключительной необходимости. Фумигация должна производиться на как можно более раннем этапе, а выбор фумиганта, его концентрации и условий применения (температуры, влажности, времени воздействия) должен быть тщательно взвешен с целью минимизации его остаточного содержания в материале растительного происхождения. Необходимо в полной мере принимать во внимание потенциальное попадание остаточных веществ в растительную фармацевтическую субстанцию и ЛРП и при необходимости внедрять меры контроля. Аспекты применения фумигации для лекарственного растительного сырья затрагиваются в Пояснительной записке по применению фумигантов (EMEA/HPMC/125562/2006) и в Ответах на вопросы по качеству ЛРП/ТЛРП (EMA/HPMC/41500/2010 в действующей редакции).

Облучение

Применение облучения ограничено или запрещено в ряде государств-членов ЕС, но даже при отсутствии запрета облучение следует применять только в случае исключительной необходимости, когда не могут быть применены другие методы.

Облучение должно производиться в установленных условиях, и безопасность облученных материалов должна проверяться в соответствии с директивой Комитета по патентованным лекарственным препаратам (CPMP) 3AQ4A «Применение ионизирующего излучения в производстве лекарственных препаратов».

Используют три типа ионизирующего излучения: гамма-лучи, рентгеновские лучи и ускоренные электроны.

Эффективность такой обработки зависит от нескольких факторов, включая состав субстрата, количество и виды микроорганизмов и применяемую дозу. Смертельная доза радиации варьируется в зависимости от ее типа и от вида микроорганизмов. Как правило, вегетативные формы бактерий более чувствительны к ионизирующему излучению, чем грибы. Рентгеновское и гамма-излучение также могут сокращать количество спор.

Требуемая доза излучения, включая обоснованные пределы, должна быть указана для каждого отдельного растительного материала. При ее определении необходимо руководствоваться указанной выше директивой CPMP 3AQ4A.

Производители, использующие ионизирующее излучение при производстве лекарственных препаратов, должны руководствоваться Приложением 12 к директиве GMP «Применение ионизирующего излучения при производстве лекарственных препаратов».

Лиофилизация

Установлено, что лиофилизация сокращает микробную контаминацию, но сведения о действии данной методики ограничены. Кроме того, чувствительность микроорганизмов к данному методу может сильно варьироваться, и условия, при которых возможно сокращение микробной контаминации, требуют оценки. С другой стороны, использование криопротекторов в процессе может способствовать выживанию микроорганизмов и их последующей активизации и росту после растворения лиофилизата. Данный вопрос должен рассматриваться в ходе валидации методики.

Обработка под высоким давлением

Обработка под высоким давлением, или обработка под высоким гидростатическим давлением и сверхвысоким давлением, представляет собой такой метод обработки, при котором исходный материал подвергают действию высокого давления до 1000 МПа (145000 psi) через среду передачи давления (воду или другие подходящие жидкости). Данный процесс используют для деактивации/уничтожения микроорганизмов, при этом органолептические свойства материала растительного происхождения (свежесть, вкус, запах и цвет) сохраняются. Кроме того, обработка под высоким давлением может использоваться для деактивации (или активации) ферментов.

Однако обработка под высоким давлением может лишь повредить микробные клетки, то есть сублетально пораженные клетки могут восстановиться и начать размножаться при попадании в благоприятные условия в ходе последующей обработки и хранения. Данное явление может вести к завышенной оценке сокращения количества микроорганизмов, поскольку результаты, полученные сразу после обработки, будут ниже показателей, которые будут достигнуты после восстановления поврежденных клеток.

Несмотря на то, что механизм деактивации путем обработки под высоким давлением недостаточно изучен, считается, что процесс компрессии вызывает повреждение клеточных мембран и макромолекулярные трансформации, например, денатурацию белков.

Обработка под высоким давлением применима к твердым веществам, жидкостям и препаратам в упаковках, поскольку высокое давление действует мгновенно и равномерно как на поверхности, так и в толще, вне зависимости от формы, размера и состава вещества. Показатели давления и температуры и время воздействия могут быть изменены для достижения оптимального эффекта, и процесс может осуществляться при комнатной, низкой или очень низкой температурах при этом время воздействия может колебаться от миллисекунды до свыше 20 минут.

Чувствительность микроорганизмов к обработке под высоким давлением варьируется и зависит от ряда факторов, поэтому условия осуществления процесса (время удерживания давления, температура в процессе, состав среды) должны тщательно выбираться для отдельного лекарственного растительного сырья, подлежащего обработке. Все условия и спецификации должны быть валидированы. Любое влияние изменения кислотности среды на состав растительного материала в процессе обработки под высоким давлением должно быть проанализировано.

Для повышения эффективности обработку под высоким давлением можно совместить с термической обработкой и циклическим воздействием давления с целью деактивации и контроля роста количества спор. Также возможно применение ультразвука, переменного тока и высоковольтных электрических импульсов.

Мгновенное контролируемое падение давления

В последние годы была разработана новая технология деконтаминации – мгновенное контролируемое падение давления (DIC – от фр. Détente Instantanée Contrôlée), которая преимущественно подходит для чувствительных к нагреванию твердых веществ и порошков. В основе метода лежит кратковременное нагревание материала и мгновенное падение давления до вакуума, которое приводит к резкому охлаждению путем испарения части воды, содержащейся в обрабатываемом материале. Клетки микроорганизмов (как споры, так и вегетативные формы) разрываются вследствие термомеханического действия. Нагрев материала может осуществляться с помощью нагнетания насыщенного или перегретого водяного пара (STEAM DIC) или сжатого воздуха, но также возможно использование других сред, например, двуокиси углерода, когда требуется достичь эффекта разложения (например, при экстракции нелетучих компонентов). Чем больше объем нагнетаемого пара или газа и короче время падения давления, тем эффективнее механическое воздействие. При неоднократном повторении процесса допускается снижение температуры нагрева для достижения требуемого сокращения микробной контаминации, что позволяет сохранить термолабильные компоненты (Multi-cycle DIC).

Возможным отрицательным эффектом данного метода является потеря летучих компонентов при авто-испарении.

Обработка щелочными или кислотными веществами

Установлено, что обработка щелочными или кислотными веществами снижает микробную контаминацию, включая споры. Однако, как правило, данный метод не применим к лекарственному растительному сырью или растительным фармацевтическим субстанциям, поскольку щелочные и кислотные вещества могут приводить к существенным изменениям компонентов растительного сырья/растительной фармацевтической субстанции. Также необходимо избегать присутствия остаточных компонентов применяемых токсических субстанций.

Введение консерванта

Введение консерванта не рассматривается как метод деконтаминации. Однако добавление консервантов для предотвращения микробного роста при хранении препарата на протяжении всего срока годности следует рассматривать как способ деконтаминации, если без использования консерванта в препарате наблюдается микробный рост. При этом консерванты не должны использоваться в качестве замены положениям GACP и GMP или для маскирования препаратов с изначально высокими уровнями микробной контаминации.

Новые, альтернативные методы

Список методов, приведенный выше, не является исчерпывающим, допустимо применение других методов. Производители и регуляторные органы несут ответственность за обеспечение надлежащей микробиологической чистоты лекарственного растительного сырья, растительных фармацевтических субстанций, ЛРП и при необходимости могут прибегать к применению соответствующих методов деконтаминации для сокращения микробной контаминации.

2.2.3. Лекарственное растительное сырье

Методы сокращения микробной контаминации лекарственного растительного сырья зависят не только от перечисленных выше специфических факторов, но также и от последующего применения лекарственного сырья. Если растительное сырье предназначено для последующей переработки, может быть достаточно сушки или заморозки растительного материала для предотвращения микробного роста и ухудшения качества до момента последующей переработки.

Использование фумигации допустимо для лекарственного растительного сырья, но должно быть ограничено, если доступны другие методы деконтаминации. Фумигацию применяют на самых ранних этапах, учитывая все значимые аспекты, меры предосторожности и запреты.

Если для сокращения микробной контаминации растительного материала используется пар, материал необходимо немедленно высушить, поскольку остатки влаги могут повлиять на его качество на последующих этапах обработки.

Облучение допустимо использовать только в исключительных случаях при недоступности каких-либо иных методов. Необходимо уделять особое внимание лекарственному растительному сырью, ввозимому из третьих стран, поскольку оно могло пройти радиационную обработку без надлежащего указания на это в документах. Необходимо внедрить специальное испытание для определения возможного облучения лекарственного растительного сырья, находящегося в зоне риска.

Обработка под высоким давлением может использоваться для сокращения бионагрузки. Данный процесс применяют на пищевых производствах в отношении фруктовых соков и фруктов, а также он подходит для некоторых видов лекарственного растительного сырья, в особенности для чувствительных к термической обработке.

2.2.4. Растительные фармацевтические субстанции

Процесс экстракции может непосредственно способствовать значительному сокращению микробной контаминации при использовании высоких концентраций этанола. Однако необходимо отметить, что экстракция холодной водой, как в случае с вымачиванием (мацерацией), может привести к существенному увеличению уровня содержания микроорганизмов. Данный аспект необходимо учитывать при разработке производственного процесса, проверять в ходе контроля качества и контролировать для установления надлежащего срока годности.

Фумигация, в целом, не является подходящим методом обработки растительных фармацевтических субстанций, и облучение таких субстанций также не рекомендовано.

Добавление консервантов к растительным фармацевтическим субстанциям может использоваться для предотвращения микробного роста, но не для сокращения микробной контаминации.

Термическая обработка (например, сверхвысокотемпературная обработка густых экстрактов) или обработка под высоким давлением допустима, однако, требуется выбор и валидация специфических условий для возможности оценки их влияния на состав субстанции. Возможные изменения должны быть изучены и обоснованы.

2.2.5. Лекарственные растительные препараты

Микробиологическая чистота ЛРП зависит от качества сырья, санитарных условий и производственного процесса. Необходимость в проведении микробной деконтаминации готового лекарственного препарата должна быть минимальной.

Европейская Фармакопея признает необходимость расширения критериев приемлемости микробиологической чистоты ЛРП в зависимости от источника сырья, метода обработки и пути введения, как описывается ниже.

Например, для лекарственных сборов допустимы относительно высокие показатели общего количества аэробных микроорганизмов и плесневых и дрожжевых грибов с учетом метода обработки кипящей водой (заваривание). Однако ненадлежащая обработка лекарственных сборов, с использованием горячей воды вместо кипящей, может привести к получению субстанций с микробиологической чистотой, не соответствующей требованиям.

Чувствительные к нагреванию ЛРП (например, эмульсии и суспензии) могут проходить обработку под высоким давлением без ущерба их физико-химическим свойствам.

Облучение и фумигация ЛРП, в целом, повсеместно недопустимы.

Добавление консервантов должно быть минимизировано, но допустимо для лекарственных препаратов, которые способствуют росту микроорганизмов при отсутствии консервантов и при упаковке в контейнеры для многократного приема. Противомикробная эффективность консервантов должна быть подтверждена в соответствии со статьей 5.1.3 Европейской Фармакопеи в процессе разработки, при выпуске в промышленное производство, по окончании срока годности и в процессе использования препарата (например, при испытании стабильности), кроме того, химическое испытание на содержание консервантов (качественный и количественный анализ), как правило, включают в спецификацию. Необходимая для предоставления информация по применению консерванта приводится в Руководстве по вспомогательным веществам в Досье к заявлению на выдачу регистрационного удостоверения лекарственного препарата (EMEA/CHMP/QWP/396951/2006). Для препаратов, применяемых в ветеринарии, действуют Руководящие указания по включению антиоксидантов и противомикробных консервантов в лекарственные препараты (CPMP/CVMP/QWP/115/95).

2.3. Испытания лекарственного растительного сырья, растительных фармацевтических субстанций и лекарственных растительных препаратов

Микробиологическую контаминацию оценивают по количеству микроорганизмов. Количество микроорганизмов определяют путем подсчета на чашках Петри колониеобразующих единиц (КОЕ) в одном миллилитре или грамме материала растительного происхождения. Согласно другой методике определяют наиболее вероятное число микроорганизмов в одном миллилитре или грамме путем наблюдения за комбинацией нескольких пробирок, в которых рост микроорганизмов происходит после разбавления и инкубации исследуемого материала. Метод наиболее вероятного числа менее точен, но он может оказаться наиболее приемлемым для материалов с очень низкой бионагрузкой.

Оба метода описываются в общей фармакопейной статье 2.6.12 Европейской Фармакопеи.

Количество микроорганизмов: методы анализа

Как правило, анализ микробиологической чистоты лекарственного растительного сырья, растительной фармацевтической субстанции и ЛРП производят в соответствии с эталонными методами, описываемыми в трех общих фармакопейных статьях Европейской Фармакопеи: 2.6.12 «Микробиологическая оценка нестерильных лекарственных средств: Испытания на определение количества микроорганизмов», 2.6.13 «Микробиологический анализ нестерильных лекарственных средств: Испытание на наличие специфических микроорганизмов», 2.6.31 «Микробиологический анализ лекарственных растительных препаратов для перорального применения и экстрактов, используемых для их приготовления».

Испытания, описываемые в общей фармакопейной статье 2.6.12 Европейской Фармакопеи, позволяют проводить количественный подсчет мезофильных бактерий и грибов, которые могут расти в аэробных условиях. В статье 2.6.31 описываются испытания на наличие специфических микроорганизмов E. coli, грамотрицательных энтеробактерий и Salmonella. Специфические микроорганизмы, приводимые в статье 2.6.13 Европейской Фармакопеи, включают те же микроорганизмы, что в статье 2.6.31, а также Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Clostridia и Candida albicans.

Пригодность используемой среды и методов должна быть подтверждена с применением эталонных тест-штаммов, описываемых в методах, приводимых в Европейской Фармакопее, о которых говорилось выше.

Поскольку традиционные микробиологические методы медленные (результаты недоступны до истечения периода инкубации в течение 5-14 дней), в Европейской Фармакопее была опубликована дополнительная общая фармакопейная статья с информацией, содействующей применению альтернативных методов (5.1.6. «Альтернативные методы контроля микробиологической чистоты»). Некоторые из этих методов показали потенциал получения результатов в реальном или почти реальном времени с возможностью более раннего осуществления корректирующих действий. Для каждого метода описывается основополагающий принцип, а затем приводятся его преимущества и недостатки. Статья 5.1.6. может выступать в качестве источника дополнительного или альтернативного традиционному микробиологическому методу подхода, а также в качестве руководства по валидации выбранного метода.

Количество микроорганизмов: критерии приемлемости

В статье 5.1.8 Европейской Фармакопеи «Микробиологическая чистота лекарственных растительных препаратов для перорального применения и экстрактов, используемых для их приготовления» изложены общие критерии приемлемости для неполного перечня специфических микроорганизмов и предельно допустимое количество микроорганизмов (в виде общего количества аэробных микроорганизмов или плесневых и дрожжевых грибов). Однако, как указано в статье 5.1.8, может возникнуть необходимость в испытании на другие микроорганизмы, или же возможно применение менее строгих критериев на основании анализа рисков, в котором должным образом учитываются происхождение сырья, количественная и качественная характеристики микробной контаминации, производственный процесс и предполагаемое применение ЛРП или экстракта.

Готовые ЛРП группируются в три категории A, B и C в зависимости от метода производства, предполагаемого применения и, в случае лекарственных сборов, метода приготовления пациентом.

Экстракты для перорального применения должны удовлетворять критериям приемлемости для категории C, если подтверждено, что метод переработки не сокращает уровень микробной обсемененности должным образом, чтобы подпадать под критерии для категории B.

Более строгие критерии приемлемости могут предъявляться к экстрактам, входящим в состав растительных фармацевтических субстанций с другими путями введения, как это изложено в статье 5.1.4. Европейской Фармакопеи «Микробиологическая чистота нестерильных растительных фармацевтических субстанций и растительного сырья для применения в фармацевтике». В данной общей статье изложены специальные правила для лекарственных форм для перорального применения, содержащих сырье природного происхождения (например, растительного), для которых не применима предварительная противомикробная обработка, и допустимо общее количество аэробных микроорганизмов в сырье свыше 103 КОЕ/г или КОЕ/мл.

Возможно определение отсутствия отдельных специфических бактерий (например, Staphylococcus aureus, E. coli, Salmonella enteric subsp, Pseudomonas aeruginosa). Критерии приемлемости для этого изложены в соответствующих категориях в статьях 5.1.4 и 5.1.8 Европейской Фармакопеи. Необходимо учитывать происхождение растительного материала при решении о включении в исследование других возможных патогенных микроорганизмов (например, виды Shigella, Campylobacter и Listeria), помимо перечисленных в Европейской Фармакопее.

В настоящий момент критерии приемлемости для лекарственного растительного сырья и растительных фармацевтических субстанций, кроме экстрактов, не представлены в Европейской Фармакопее. Предельные значения общего количества аэробных микроорганизмов и плесневых и дрожжевых грибов, а также специфических микроорганизмов должны устанавливаться для каждого конкретного случая.

Дальнейшие указания по интерпретации и оценке рисков, а также руководство по параметрам, которые необходимо учитывать при установлении данных предельных значений заявителем, приводятся в документе «Ответы на вопросы по качеству лекарственных растительных препаратов/традиционных лекарственных растительных препаратов» (EMA/HMPC/41500/2010 в действующей редакции), а также в «Руководстве по спецификациям: процедуры испытаний и критерии приемлемости для лекарственного растительного сырья, растительных фармацевтических субстанций и лекарственных растительных препаратов/традиционных лекарственных растительных препаратов» (EMA/CPMP/QWP/2820/00, EMA/CVMP/815/00, EMA/HMPC/162241/2005 в действующих редакциях).

Микотоксины

Необходимо всеобъемлющее проведение оценки вероятности контаминации микотоксинами даже после осуществления противомикробной деконтаминации. В отношении афлатоксинов в Европейской Фармакопее в статье 2.8.18 приводится метод определения афлатоксина B1 в лекарственном растительном сырье, а также предельное значение его содержания в растительном сырье на уровне не более 2 мкг/кг, если иное не указано в фармакопейной статье на сырье. В статье Европейской Фармакопеи 2.8.18 по данному методу анализа указано, что уполномоченный орган может также запросить соблюдение предельного значения по сумме афлатоксинов (B1, B2, G1 и G2) – не более 4 мкг/кг.

В отношении охратоксина A процедура, изложенная в статье Европейской Фармакопеи 2.8.22, и критерии приемлемости приводятся в отдельных фармакопейных статьях.

Поскольку контаминацию микотоксинами принято считать неравномерной, микотоксины могут содержаться только в отдельных частях растительного материала (например, точечная контаминация грибами). Данный аспект должен быть тщательно проанализирован, и на основании анализа должен быть установлен режим отбора проб для определения риска контаминации микотоксинами³.

Потеря в массе при высушивании, влажность или активность воды

Проведение испытаний лекарственного растительного сырья/растительных фармацевтических субстанций на потери в массе при высушивании, влажность и активность воды дает преимущества при оценке риска потенциального микробного роста. Подобные испытания не могут заменить испытания на общее количество аэробных микроорганизмов и плесневых и дрожжевых грибов, однако, они позволяют получить обоснование для проведения выборочных испытаний лекарственного растительного сырья/ растительной фармацевтической субстанции/ готового лекарственного препарата.

Гигроскопичное лекарственное растительное сырье/растительные фармацевтические субстанции более благоприятны для микробного роста, поскольку значительное количество влаги извне поглощается растительным сырьем/субстанцией в процессе хранения. В связи с этим, критерии приемлемости показателей влажности должны оцениваться в свете поглощения материалом влаги. Испытание на потерю в массе при высушивании может давать надлежащие результаты, однако, не для всех экстрактов (например, расторопши), в таких случаях предпочтительно определять влажность (согласно статье 2.5.12 Европейской Фармакопеи).

Для растительного материала, содержащего эфирные масла, требуется проведение специфического испытания на воду.

В Европейской Фармакопее описывается испытание на «Воду в эфирных маслах» (статья 2.8.5), метод «Определение воды путем дистилляции» (статья 2.2.13), который применим к материалам растительного происхождения, и метод «Вода – определение полумикрометодом» (статья 2.5.12) – к экстрактам.

Активность воды (aw) – это мера энергетического состояния воды в системе и один из самых значимых факторов в определении возможности и скорости роста микроорганизмов. Поскольку нижний порог содержания воды, доступной для микробного роста, определяет именно активность воды, а не влажность, контроль данного показателя является важным инструментом контроля микробного роста, и испытание на определение активности воды может дать преимущество в прогнозировании потенциального роста микробиологической контаминации в процессе хранения.

Общепринято считать, что материалы с активностью воды ниже 0,60 не способствуют росту в них плесневых и дрожжевых грибов. Наименьший показатель активности воды, при котором происходит рост большинства бактерий и грибов, составляет 0,85 и 0,70 соответственно, тогда как высушенные материалы растительного происхождения, хранящиеся в нормальных условиях, имеют более низкий показатель активности воды (как правило, 0,50-0,60). Галофильные (с др.-греч. буквально «любящие соль») бактерии растут при активности воды 0,75, но данные об их вреде здоровью населения отсутствуют. За исключением Staphylococcus aureus, минимальный показатель активности воды, необходимый для роста патогенных бактерий, вызывающих пищевые инфекции или отравления, составляет ≥0,93. Staphylococcus aureus может пролиферировать в препаратах с активностью воды до 0,86. Однако для производства бактериями вида Staphylococcus aureus энтеротоксинов может потребоваться более высокий показатель.

Этанол

Методы определения содержания спирта в жидких фармацевтических субстанциях, таких как экстракты и настойки, изложены в статье 2.9.10 Европейской Фармакопеи «Содержание этанола». Основанием для сокращения (или опущения) микробиологических испытаний растительной фармацевтической субстанции, содержащей этанол, может быть его концентрация.

Консерванты

Для ЛРП, требующих добавления противомикробного консерванта, например, жидких лекарственных форм для перорального применения, должны указываться критерии приемлемости содержания консерванта, исходя из уровней, необходимых для поддержания микробиологической чистоты препарата на протяжении срока его хранения и применения. Необходимо доказать эффективность нижней указанной концентрации противомикробного консерванта в отношении контроля количества микроорганизмов на основании статьи 5.1.3 Европейской Фармакопеи «Эффективность противомикробных консервантов». Аналогичный подход применим к растительным фармацевтическим субстанциям с добавлением консервантов.

Как правило, должен осуществляться контроль готовой продукции, а также должно проводиться испытание стабильности для качественного и количественного определения содержания противомикробного консерванта. При определенных обстоятельствах испытания в процессе производства препарата могут полностью заменить контроль готовой продукции. При проведении испытаний на содержание противомикробного консерванта в процессе производства критерии приемлемости должны приводиться в рамках спецификации.

Остаточное содержание фумигантов

Вероятность присутствия остатков фумигантов в лекарственном растительном сырье и в растительных фармацевтических субстанциях должна быть в полной мере оценена. Необходимость проведения испытаний на остаточное содержание фумигантов в ЛРП отсутствует, если этот параметр контролировался на этапе обработки лекарственного растительного сырья/фармацевтической субстанции.

При необходимости для контроля потенциального остаточного содержания фумигантов используют надлежащие валидированные методы с установленными критериями приемлемости.

Остаточное «излучение»

Вероятность остаточного содержания излучения в лекарственном растительном сырье и в растительных фармацевтических субстанциях должна быть в полной мере оценена, и должны быть проведены соответствующие испытания, если есть причина или опасение, связанные с облучением материала. В подобных случаях необходимо применять надлежащие валидированные методы с целью контроля вероятности присутствия остаточного излучения, при этом критерии приемлемости должны быть обоснованы.

Частота проведения испытаний – контроль готовых препаратов и испытания стабильности

Количество микроорганизмов определяют с использованием фармакопейных процедур или каких-либо иных валидированных процедур с такой частотой отбора проб и/или в такие контрольные моменты времени в процессе производства, которые устанавливаются на основании данных и практического опыта (Руководство по качеству лекарственных растительных препаратов/традиционных лекарственных растительных препаратов).

Прочие указания по проведению рутинных процедур и сокращенным микробиологическим испытаниям, а также испытаниям на микотоксины и в ходе исследований стабильности, приводятся в документе «Ответы на вопросы по качеству лекарственных растительных препаратов/традиционных лекарственных растительных препаратов» (EMA/HMPC/41500/2010) и в документе «Качество лекарственных средств – ответы на вопросы: Часть 1 (Действующее вещество – Сырье растительного происхождения)».

2.3.1 Лекарственное растительное сырье

Как правило, для лекарственного растительного сырья применяют регулярные испытания. Предельные значения и критерии приемлемости должны устанавливаться на основании анализа рисков с учетом специфической микробной контаминации, данных валидационных исследований совместимости последующих этапов производственного процесса с целью снижения количества микроорганизмов, а также принимая во внимание предполагаемое применение. Кроме того, необходимо учитывать вероятность контаминации микотоксинами.

2.3.2. Растительные фармацевтические субстанции

Испытания на исключение микробной контаминации или ее сокращение в растительных фармацевтических субстанциях, таких как экстракты и настойки, которые зависят от содержания этанола, должны иметь научную базу в качестве обоснования. Частота проведения испытаний растительных фармацевтических субстанций должна быть обоснована заявителем, например, исходя из валидации производственного процесса и времени промежуточного хранения нефасованной лекарственной формы. Кроме того, необходимо принимать во внимание вероятность контаминации микотоксинами, учитывая наличие данных об отсутствии микотоксинов в растительной фармацевтической субстанции и пригодность условий хранения растительной фармацевтической субстанции для предотвращения роста микроорганизмов, продуцирующих микотоксины.

2.3.3. Лекарственные растительные препараты

ЛРП должны проходить испытания на микробиологическую чистоту. Выборочные испытания допустимы в случаях, когда растительные компоненты испытывают перед производством, и валидационные испытания показали отсутствие существенного риска микробной контаминации в ходе производственного процесса. Кроме того, необходимо учитывать вероятность контаминации микотоксинами, принимая во внимание наличие данных об отсутствии микотоксинов в лекарственном растительном сырье/растительной фармацевтической субстанции и пригодность условий хранения лекарственного растительного сырья/растительной фармацевтической субстанции для предотвращения роста микроорганизмов, продуцирующих микотоксины.

Предельные показатели микробиологической чистоты готового лекарственного средства будут зависеть от лекарственной формы и пути введения.

В древовидной схеме решений №8 к документу «ICH Q 6A Спецификации: Процедуры испытания и критерии приемлемости для новых фармацевтических субстанций и новых лекарственных средств: Химические субстанции» (CPMP/ICH/367/96), содержатся дополнительные руководящие принципы по применению контроля микробиологической чистоты у нестерильных лекарственных средств.

3. Заключение

Поскольку лекарственное растительное сырье имеет природное происхождение, содержание в нем микроорганизмов выше, чем в лекарственном сырье с установленным химическим составом. В этом заключается основная сложность его переработки, поскольку вероятен перенос микроорганизмов из лекарственного растительного сырья в растительную фармацевтическую субстанцию и лекарственный растительный препарат. Кроме того, споры и микотоксины, продуцируемые микроорганизмами, также могут присутствовать в растительном сырье, и их устранение представляет еще большую сложность.

Удовлетворительное качество ЛРП в отношении контаминации патогенными микроорганизмами и микотоксинами нельзя проконтролировать только путем испытаний готового лекарственного средства. Контроль микробиологической чистоты должен являться частью производственного процесса, начиная от сырья и заканчивая готовым препаратом. Минимизация и проведение испытаний/осуществление мониторинга микробиологической контаминации и микотоксинов в лекарственном растительном сырье, растительных фармацевтических субстанциях и лекарственных растительных препаратах должны основываться на анализе рисков, проводимом для каждого случая отдельно.

Необходимо рассматривать и учитывать ряд критических точек, среди которых: источник растительного сырья, данные о микроорганизмах, применяемые производственные процессы и любые процедуры деконтаминации, микробиологическая чистота вспомогательных веществ, защитная способность выбранного материала упаковки, лекарственная форма, путь введения, позология и популяционные группы пациентов.

Соответствие нормам GACP и GMP на протяжении всего производственного процесса от растительного сырья до готового лекарственного средства является исключительно важным аспектом обеспечения надлежащей микробиологической чистоты ЛРП. ЛРП не должен служить благоприятной средой для роста микроорганизмов; процессы сушки и итоговая влажность представляют собой критические параметры в данном отношении.

Если растительное сырье, как правило, растительная фармацевтическая субстанция или ЛРП требуют применения деконтаминационной обработки, эта необходимость должна быть в полной мере обоснована, а сам метод деконтаминации тщательно выбран. Необходимо учитывать изначальный и желаемый конечный максимальный уровень содержания микроорганизмов, кроме того, необходимо предоставить подтверждение того, что процесс деконтаминации не изменяет химический состав растительного материала, и после него в материале отсутствуют какие-либо остаточные токсичные компоненты.

Спецификации лекарственного растительного сырья, растительной фармацевтической субстанции и ЛРП должны включать испытания на общее количество аэробных микроорганизмов и дрожжевых и плесневых грибов и на отсутствие некоторых специфических микроорганизмов, если не указано и подтверждено иное. Предельные значения и аналитические методы для экстрактов и ЛРП приводятся в Европейской Фармакопее, однако, допустимо применение альтернативных валидированных методов. Испытания на потерю массы при высушивании/влажность и наличие микотоксинов также должны рассматриваться в ходе анализа рисков. Однако данные параметры не заменяют непосредственно испытание на микробную контаминацию. Отдельные вопросы и ответы на них касаемо описанных процедур будут включены в Ответы на вопросы по качеству лекарственных растительных препаратов/традиционных лекарственных растительных препаратов (EMA/HMPC/41500/2010).

4. Определения

Критерии приемлемости: численные предельные значения, диапазоны или иные соответствующие меры для определения приемлемости результатов процедур анализа.

Компоненты с известной терапевтической активностью: химически определяемые субстанции или группы субстанций, которые, по общепринятому мнению, существенно увеличивают терапевтическую активность лекарственного растительного сырья, растительной фармацевтической субстанции или лекарственного растительного препарата.

Продукт разложения: любая примесь, образующаяся в результате изменения химического состава действующего вещества, внесенного в процессе производства и/или хранения действующего вещества / лекарственного средства путем воздействия, например, светом, температурой, средой иной кислотности, водой или путем взаимодействия с вспомогательным веществом и/или системой первичной упаковки. В связи с определенным происхождением растительного сырья для лекарственного растительного сырья/растительных фармацевтических субстанций/лекарственных растительных препаратов необходимо определять только продукты разложения, обладающие токсическим действием.

Экстрагенты: растворители, которые используются в процессе экстракции.

Лекарственные растительные препараты: любые лекарственные препараты, которые в качестве действующего вещества содержат один или несколько видов исключительно растительного сырья или одну или несколько растительных фармацевтических субстанций, или один или несколько таких видов лекарственного растительного сырья в комбинации с одной или несколькими растительными фармацевтическими субстанциями.

Растительные фармацевтические субстанции получают путем таких видов обработки лекарственного растительного сырья, как экстракция, дистилляция, отжим, фракционирование, очистка, концентрирование или ферментация. К ним относятся мелко измельченное или порошкообразное растительное сырье, настойки, экстракты, эфирные масла, отжатые соки и обработанные экссудаты.

Лекарственное растительное сырье: все обычно необработанные высушенные, но иногда и свежие целые или нарезанные растения, водоросли, грибы или лишайники, либо их части. Лекарственным растительным сырьем также считаются некоторые экссудаты, которые не подвергались особой обработке. Лекарственное растительное сырье четко определятся по используемой части растения и по ботаническому наименованию согласно биноминальной номенклатуре (род, вид, подвид и ученый).

Лекарственные сборы состоят из одного или нескольких видов исключительно растительного сырья и предназначены для приготовления жидких растительных фармацевтических субстанций для перорального применения путем отваривания, настаивания или вымачивания. Такие растительные фармацевтические субстанции готовят непосредственно перед применением. Лекарственные сборы обычно поставляются в нефасованном виде или упакованными в саше (чайные пакетики).

Примесь:

1) Какой-либо компонент лекарственного растительного сырья, который не является собственно лекарственным растительным сырьем.

2) Какой-либо компонент лекарственного растительного сырья / растительной фармацевтической субстанции / лекарственного растительного препарата, который не является собственно лекарственным растительным сырьем / растительной фармацевтической субстанцией или вспомогательным веществом для приготовления растительной фармацевтической субстанции / лекарственного растительного препарата.

Маркеры: компоненты с определенным химическим составом или группы компонентов в составе лекарственного растительного сырья, растительной фармацевтической субстанции или лекарственного растительного препарата, представляющие интерес с точки зрения контроля, независимо от того, обладают ли они какой-либо терапевтической активностью. Маркеры служат для расчета количества лекарственного растительного сырья или растительной фармацевтической субстанции в лекарственном растительном препарате, если определено количество маркера в лекарственном растительном сырье или растительной фармацевтической субстанции.

Существует две категории маркеров:

Активные маркеры – компоненты или группы компонентов, которые, согласно общему мнению, добавляют терапевтической активности.

Аналитические маркеры – компоненты или группы компонентов, которые служат для аналитических целей.

Растворитель: неорганическая или органическая жидкость, используемая для приготовления растворов или суспензий при производстве растительной фармацевтической субстанции или лекарственного растительного препарата.

Спецификация: список испытаний и ссылок на процедуры анализа, а также соответствующие критерии приемлемости, которые представляют собой численные пределы, диапазоны или другие критерии для описанных испытаний. В спецификации устанавливается набор критериев, которым должны соответствовать лекарственное растительное сырье / растительная фармацевтическая субстанция или лекарственные растительные препараты, чтобы считаться пригодными для предполагаемого использования. «Соответствие спецификациям» означает, что лекарственное растительное сырье / растительная фармацевтическая субстанция и/или лекарственные растительные препараты будут отвечать перечисленным критериям приемлемости при проведении испытаний с использованием перечисленных методов анализа. Спецификации являются обязательными стандартами качества, которые согласовываются между соответствующим правительственным регуляторным органом и заявителем.

Специфическое испытание: испытание, которое считается применимым к определенному лекарственному растительному сырью / растительной фармацевтической субстанции или определенному лекарственному растительному препарату в зависимости от их специфических свойств и/или предполагаемого применения.

Традиционные лекарственные растительные препараты: лекарственные препараты для медицинского применения, которые отвечают условиям, изложенным в 1-м пункте статьи 16аДирективы 2001/83/EC в действующей редакции.

5. Список литературы

Allaf T, Besombes C, Mih I, Lefevre L and Allaf K. Decontamination of Solid and Powder Foodstuffs using DIC Technology. Advances in Computer Science and Engineering, Dr. Matthias Schmidt (Ed.), ISBN: 978-953-307-173-2, InTech, Available from: http://www.intechopen.com/books/advancesin-computer-science-and-engineering/decontamination-of-solid-and-powder-foodstuffs-using-dic-technology.

Busch J, Allmann I, Hölz H, Klötzel M, Kühn M, Mackiw T et al. Evaluation of the risk of aflatoxin contamination in fresh medicinal plants. Pharmeuropa Bio & Scientific Notes, 2012, (39-54): 075-2164.

Cheftel JC. High-pressure, microbial inactivation and food preservation. Food Science and Technology International, 1995 1 (2-3): 75-90.

Ciurzyńska A and Lenart A. Freeze-Drying – Application in Food Processing and Biotechnology – A Review. Pol. J. Food Nutr. Sci., 2011, 61(3):165-171.

Commission SFSTP. Guédon D, Brum M, Bizet D, Bizot S, Bourny E, Compagnon PA et al. Impurities in herbal substances, herbal preparations and herbal medicinal products. I. Microbial contamination. STP pharma pratiques, 2007, 17(4):183-208.

Commission SFSTP. Guédon D, Brum M, Taoubi K, Bizet D, Bizot S, Bourny E et al. Impurities in herbal substances, herbal preparations and herbal medicinal products. II. Mycototoxins. STP pharma pratiques, 2007,17(4):209-225.

Council Directive 1999/2/EC of 22 February 1999 on the approximation of the laws of the Member States concerning foods and food ingredients treated with ionising radiation.

Council Directive 89/365/EEC of 30 May 1989 amending Directive 79/117/EEC prohibiting the placing on the market and use of plant protection products containing certain active substances.

CPMP/CVMP/QWP/115/95 Note for guidance on Inclusion of Antioxidants and Antimicrobial Preservatives in Medicinal Products.

CPMP/ICH/367/96 ICH Topic Q6A Specifications: Test Procedures and Acceptance Criteria for New Drug Substances and New Drug Products: Chemical Substances.

CPMP 3AQ4A “The use of Ionizing Radiation in the Manufacture of Medicinal Products”.

D’Souza T. Effect of high hydrostatic pressure processing (HHPP) on Salmonella enterica in peanut butter - Thesis submitted to the Graduate School-New Brunswick Rutgers, The State University of New Jersey in partial fulfilment of the requirements for the degree of Master of Science Graduate program in Food Science. New Brunswick, New Jersey, May 2012.

EFSA. Scientific Opinion on the Chemical Safety of Irradiation of Food EFSA Panel on Food Contact Materials, Enzymes, Flavourings and Processing Aids (CEF). EFSA Journal, 2011, 9(4):1930.

EFSA. Scientific Opinion on the efficacy and microbiological safety of irradiation of food EFSA Panel on Biological Hazards (BIOHAZ). EFSA Journal, 2011, 9(4):2103.

EFSA. Statement summarising the Conclusions and Recommendations from the Opinions on the Safety of Irradiation of Food adopted by the BIOHAZ and CEF Panels. EFSA Journal, 2011, 9 (4):2107.

EMA/CPMP/QWP/2819/00(EMA/CVMP/814/00, EMA/HMPC/201116/2005) current revision: Guideline on quality of herbal medicinal products/traditional herbal medicinal products.

EMA/CPMP/QWP/2820/00(EMA/CVMP/815/00, EMA/HMPC/162241/2005) current revision: Guideline on specifications: test procedures and acceptance criteria for herbal substances, herbal preparations and herbal medicinal products/traditional herbal medicinal products.

EMA/HMPC/246816/2005: Guideline on good agricultural and collection practice (GACP) for starting materials of herbal origin.

EMA/HMPC/41500/2010 current revision: Questions & answers on quality of herbal medicinal products/traditional herbal medicinal products.

EMA/HMPC/84789/2013: Reflection paper on quality of essential oils as active substances in herbal medicinal products/traditional herbal medicinal products.

EMA: Quality of medicines questions & answers. Part 1; Active substance – starting materials of herbal origin.

EMEA/CHMP/QWP/396951/2006 Guideline on Excipients in the Dossier for Application for Marketing Authorisation of a Medicinal Product.

EMEA/HMPC/125562/2006: Reflection paper on the use of fumigants.

European Commission Brussels. Volume 4; EU Guidelines to Good Manufacturing Practice. Medicinal Products for Human and Veterinary Use. Part I and II.

European Commission Brussels. 1 September 2008. Volume 4; EU Guidelines to Good Manufacturing Practice. Medicinal Products for Human and Veterinary Use. Annex 7: Manufacture of Herbal Medicinal Products.

European Commission Brussels. Volume 4; EU Guidelines to Good Manufacturing Practice. Medicinal Products for Human and Veterinary Use. Annex 12: Use of ionising radiation in the manufacture of medicinal products.

European Commission Brussels. Report on Food and Food Ingredients treated with Ionising Radiation for the year 2011. From the Commission to the European Parliament and the Council 14.11.2012 Com 659.

European Pharmacopoeia 8.0 Ed4.

Gaedcke F, Steinhoff B, Blasius H. Herbal Medicinal Products: Scientific and Regulatory Basis for Development, Quality Assurance and Marketing Authorisation. Microbial decontamination. Medpharm GmbH Scientific Publishers Stuttgart, 2003:54-58.

Gaedcke F, Steinhoff B, Blasius H. Herbal Medicinal Products: Scientific and Regulatory Basis for Development, Quality Assurance and Marketing Authorisation. Tests for special impurities. Medpharm GmbH Scientific Publishers Stuttgart, 2003:104-107.

Helliwell K, Bellenot D, Valder C, Dadole E. A Consideration of the Analytical Requirements for Fresh Herbal Drugs used to produce Herbal Drug Preparations - Pharmeuropa Readers’ tribune, June 2012.

Hugo WB, Russell AD. Pharmaceutical Microbiology. Blackwell Scientific Publications. 7. ed. 2004.

IARC Monographs on the evaluation of the carcinogenic risk of chemicals to humans. 2002, 82:171-300. http://toxnet.nlm.nih.gov/cgi-bin/sis/search/f?./temp/~gFUH0h:2.

Kavanagh K (Ed.). Fungi: Biology and Application, 2nd Ed, Wiley, 2011.

Kosalec I, Cvek J, Tomić S. Contaminants of Medicinal Herbs and Herbal Products. Arh Hig Rada Toksikol, 2009, 60:485-501.

Maitland JE. High Hydrostatic Pressure Processing Reduces Salmonella enterica from Diced and Whole Tomatoes. Thesis submitted to the faculty of the Virginia Polytechnic Institute and State University in partial fulfilment of the requirements for the degree of Master of Science in Life Sciences in Food Science and Technology. Blacksburg, Virginia. April 30, 2009.

Morton HE. The Relationship of Concentration and Germicidal Efficiency of Ethyl Alcohol. Annals of the N. Y. Academy of Sciences. 1950, 53:191-196.

Pinon A, Alexandre V, Cupferman S, Crozier A, Vialette M. Growth, Survival and Inactivation of Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus Strains of Various Origin in the Presence of Ethanol. International Journal of Cosmetic Science. 2007,29:111-119.

Smelt JPPM. Recent advances in the microbiology of high pressure processing. Trends in Food Science & Technology. 1998, 9(4):152–158.

Somolinos M, García D, Pagán R, Mackey B. Relationship between Sublethal Injury and Microbial Inactivation by the Combination of High Hydrostatic Pressure and Citral or tert-Butyl Hydroquinone. Appl Environ Microbiol. 2008, 74(24):7570–7577.

Thongphasuk P, Thongphasuk J. Effects of irradiation on active components of medicinal plants: A review. Rangsit Journal of Arts and Sciences, Rangsit University. 2012, 2(1):57-71.

____________________________

4 For the preparation of the reflection paper the Ph. Eur. 8.0 ed. was used. Applicants should consult the current version of the Ph. Eur.

United States Pharmacopoeia (USP) Method <1112> - Application of water activity determination to non sterile pharmaceutical products.

WHO, IARC Monographs on the evaluation of carcinogenic risks to humans, Volume 82 some traditional herbal medicines, some mycotoxins, naphthalene and styrene, 2002 IARC press, Lyon, France, (available on http://monographs.iarc.fr/ENG/Monographs/vol82/mono82.pdf).

WHO 2007. Guidelines for assessing quality of herbal medicines with reference to contaminants and residues.

Термин «лекарственное растительное сырье» (herbal substance) следует считать эквивалентным термину «материал растительного происхождения» (herbal drug), как он определяется в Европейской фармакопее, а термин «растительная фармацевтическая субстанция» (herbal preparation) следует считать эквивалентным термину «фармацевтическая субстанция из материала растительного происхождения» (herbal drug preparation), как он определяется в Европейской фармакопее.

Директива 2001/83/EC в действующей редакции и Директива 2001/82/ЕС в действующей редакции.

В общей фармакопейной статье 2.8.20 Европейской Фармакопеи «Материалы растительного происхождения: отбор проб и пробоподготовка» приводится план отбора проб материалов растительного происхождения.