Оценка иммуногенности терапевтических белков, полученных при помощи биотехнологических методов

Подробнее
Текстовая версия:

ОЦЕНКА ИММУНОГЕННОСТИ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ БЕЛКОВ, ПОЛУЧЕННЫХ ПРИ ПОМОЩИ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ

КРАТКОЕ СОДЕРЖАНИЕ

Постоянно увеличивается число биологически/биотехнологически полученных белков, используемых в качестве терапевтических средств. Эти продукты могут вызвать нежелательный иммунный ответ у пациентов, что может быть обусловлено влиянием различных факторов, включая факторы, связанные с состоянием пациента и его заболеванием, а так же с самим продуктом. Данный документ содержит справочную информацию относительно потенциальных причин и влияния иммуногенности и предоставляет общие рекомендации для выполнения систематической оценки иммуногенности с точки зрения регистрации препаратов на рынке.

Ожидаемая польза неклинической оценки иммуногенности биологического лекарственного продукта у человека невысока, из-за неизбежной иммуногенности человеческих белков у животных. В то время как неклинические исследования, нацеленные на прогноз иммуногенности у человека обычно не требуются, исследования на животных могут, например, быть значимыми в оценке последствий иммунного ответа.

Важно принять правильную стратегию развития соответствующего скрининга и подтверждающих испытаний, чтобы измерить иммунную реакцию на терапевтический белок. Может понадобиться валидация оценка способности к различению нейтрализирующих и не-нейтрализцирующих антител, и для использования в базовых клинических испытаниях, а так же как в пострегистрационных испытаниях.

В клинической практике тщательное планирование оценки иммуногенности должно включать данные, систематически собираемые у достаточного числа пациентов. Для конкретного продукта желательно стандартизировать выборку на этапах исследований (например, выборка на начальном этапе , во время проведения лечения, и в дальнейшем). График осуществления выборки для каждого продукта определяется в зависимости от конкретного случая, учитывая риски, связанные с нежелательным иммунным ответом у пациентов. Данные по влиянию на эффективность и безопасность должны быть собраны, чтобы полностью понять клинические последствия иммунного ответа. Проблемы иммуногенности должны быть в дальнейшем отражены в Плане менеджмента рисков.

Область применения данной директивы достаточно широка применимость. Ее положения могут применяться в зависимости от конкретного случая, чтобы соответствовать индивидуальной программе развития. Заявители должны рассмотреть возможность обратиться за научной рекомендацией от EMEA или от Национальных компетентных органов.

1. ВВЕДЕНИЕ

Большинство биологически/биотехнологически полученных белков вызывает нежелательную иммунную реакцию, которая обуславливается более чем одним единственным фактором. Этот иммунологический ответ является сложным и помимо формирования антитела могут происходить другие реакции, такие как активация T клеток или врожденная активация иммунной реакции.

Последствия иммунной реакции на терапевтический белок колеблются от промежуточного появления антитела без какого-либо клинического значения до серьезных опасных для жизни состояний. Потенциальные клинические последствия нежелательной иммунной реакции - потеря эффективности терапевтического белка, серьезные общие иммунный эффекты, такие как анафилаксия, и, для терапевтических белков, используемых для замены, потенциальная кросс реактивность с эндогенным аналогом в случае, если он все еще вырабатывается.

Многие факторы могут влиять на иммуногенность терапевтических белков. Они определяются как связанные с состоянием пациента, заболеванием или продуктом. Связанные с состоянием пациента факторы, которые могли бы предрасположить человека к иммунной реакции, включают: лежание в основе болезни, генетического фона, свободного статуса, включая сопутствующее заболевание, генетический аспект, иммунный статус, включая иммуномоделирующую терапию и режим дозирования. Связанные с продуктом факторы также влияют на вероятность возникновения иммунной реакции, например, производственный процесс, состав и характеристики стабильности.

Хотя данные по возможным нежелательным иммунным реакциям на терапевтические белки требуются до выдачи регистрационного удостоверения, с проблемами можно также столкнуться в постмаркетинговый период. Заявитель должен включать в заявку резюме исследований иммуногенность в соответствующих разделах с полной перекрестной ссылкой на данные в соответствующих модулях досье. В зависимости от иммуногенного потенциала терапевтического белка и редкости заболевания, количество данных об иммуногенности до утверждения могло бы быть ограничено. Дальнейшее систематическое тестирование иммуногенности может стать необходимым после выдачи регистрационного удостоверения и может быть включено в план менеджмента рисков.

2. СФЕРА ДЕЙСТВИЯ

Общие принципы, принятые и разъясненные в данном документе, главным образом, относятся к вопросам развития нежелательной иммунной реакции на терапевтический белок у пациентов и систематической оценки данного факта. Директива применима к белкам и полипептидам, их производным и продуктам, в состав которых они входят, например, конъюгаты. Эти белки и полипептиды главным образом производятся из рекомбинантных или не-рекомбинантных экспрессирующих систем. В данной директиве используется термин “терапевтический белок”. Данная директива должна применяться в привязке к другим соответствующими руководствами, например:

• Руководство по биологически подобным (биоподобным) лекарственным продуктам;

Руководство по сравнимости полученных биотехнологическим способом лекарственных продуктов после внесения изменений в производственный процесс.

Данное руководство должно применяться в привязке к вступительной части и общим принципам (4), а также части III Приложения I Директивы в последней редакции.

Последствия иммунной реакции на терапевтический белок колеблются от промежуточного появления антитела без какого-либо клинического значения до серьезных опасных для жизни состояний. Как правило, терапевтические белки должны рассматриваться как отдельные продукты, и опыт, полученный при изучении связанных белков может считаться только вспомогательным. Также в этом отношении необходимо учитывать сопутствующие лекарственные средства и другие связанные с пациентом факторы, как и в случае с сопутствующим заболеванием, как это также может влиять на клинические проявления иммуногенности. Поэтому оценка иммуногенности должна проводиться индивидуально для каждой группы критерия/пациента.

Оценка иммуногенности должна быть мультидисциплинарной задачей, охватывая совместные усилия экспертов качества, неклинических и клинических исследований.

Данный документ дает общие рекомендации и принципы для разработчиков и экспертов в оценке терапевтических протеинов, полученных биотехнологическим способом, в сфере подхода с оценке иммуногенности с точки зрения регистрации на рынке. Сфера действия данного руководства имеет широкий спектр. Таким образом, принципы могут быть адаптированы в зависимости от конкретного случая, чтобы соответствовать индивидуальному плану исследований. Для обоснования подхода к оценке иммуногенности заявители должны учитывать как риск развития нежелательной иммунной реакции, так и потенциальные клинические последствия как указано ниже. Подход, использованный для моделирования концепции развития иммуногенности, должен быть полностью обоснован, например, в случае не проведения оценки или измерения иммунной реакции, предложенных в данном руководстве. Заявителям следует по возможности обратиться в EMEA или от Национальные уполномоченные органы для научной консультации.

4.1 Факторы, которые могут влиять на развитие иммунной реакции на терапевтический белок

4.1.1 Факторы, связанные с пациентом или заболеванием

Связанные с пациентом факторы, которые могли бы влиять на иммунную реакцию на терапевтический белок, могут включать генетические факторы, возраст пациента, связанные с болезнью факторы, включая иные виды лечения и предыдущее воздействие подобных белков.

Генетические факторы, модулирующие иммунный ответ

Генетические факторы могут изменить иммунную реакцию на терапевтический белок и привести к изменчивости у разных пациентов. Аллельный полиморфизм в главном комплексе гистосовместимости (MHC), влияющий на аффинность и стабильность взаимодействия между молекулами MHC и аллергенными пептидами, и генами, кодирующими рецепторы клеток T-хелперов, может влиять на иммунные реакции и иммунологическая индукция толерантности.

Иммунные реакции могут произойти, даже если последовательность аминокислот терапевтического белка полностью повторяет человеческую.

Другими генетическими факторами, влияющими на иммуногенность, могут быть генные полиморфизмы цитокинов, которые играют роль в точной регулировке иммунной реакции (например, интерлeйкин 10, TGF-бета и т.д.).

Генетические факторы, относящиеся к генному дефекту

Если терапевтический белок используется для замены эндогенного белка, пониженный уровень или даже недостаток этого белка может влиять на иммунологическую толерантность, так как для таких пациентов физиологический антиген может представлять нео-антиген.

Возраст

Результаты одной возрастной группы совсем не обязательно могут быть спроецированы на другие, так как иммунный ответ на терапевтический белок может быть явлением, зависящим от возраста. У детей может различаться иммунная реакция на эти белки. Если продукт предназначен для детей, исследованиях иммуногенности должны быть выполнен в этой возрастной группе (см. раздел 4.5.4). Если продукт предназначен для пожилых людей, оценку следует проводить для потенциально измененной иммунной реакции.

Связанные с болезнью факторы

Основная болезнь пациента может быть важным фактором в контексте развития нежелательной иммунной реакции.

Некоторые пациенты с хроническими инфекциями могут быть более склонными к иммунной реакции, начиная так как их иммунная система находится в активизированном состоянии.

При других условиях (например, недоедание, прогрессирующая стадия метастазирования, прогрессирующая стадия ВИЧ, отказ органа), иммунная реакция на введение терапевтического белка может быть менее вероятной произойти из-за ослабленной иммунной системы.

Для некоторых продуктов было выявлено, что развитие ответа антитела может отличаться для различных терапевтических признаков или различных стадий болезни. Поэтому иммуногенность обычно следует изучать отдельно для каждой болезни или стадии болезни как часть клинического исследования.

Сопутствующая терапия

Сопутствующая терапия может или уменьшить или увеличить риск иммунной реакции на терапевтический белок. Как правило, иммунная реакция на терапевтический белок снижается, при использовании иммуносупрессоров. Также следует обратить внимание на предыдущую терапию, которая может смодулировать иммунную реакцию на терапевтический белок и которая имеет долгосрочное воздействие на иммунную систему. Если клинические испытания выполнены в комбинации с иммунодепрессантами, заявка на использованию терапевтического белка в монотерапии должна сопровождаться соответствующими клиническими данными по профилю иммуногенности при отсутствии иммунодепрессантов, т.е., данные об иммуногенности от комбинации с иммунодепрессантами не важны для назначения монотерапии.

Продолжительность, путь введения, методы обращения

Факторами, усиливающими иммунную реакцию на терапевтический белок, могут стать пути введения, доза, и схема применения.

Продукты, вводимые внутривенно, могут быть менее иммуногенными, чем вводимые подкожно или внутримышечно.

Краткосрочная терапия обычно с меньшей долей вероятности связана с иммунной реакцией чем долгосрочная; лекарственные средства, вводимые с регулярной периодичностью, обычно менее иммуногены, чем ЛС, применяемые периодически.

ЛС, применяемые нерегулярно или повторное проведение терапии после длительного перерыва в лечении могут с большей доли вероятности быть связаны с иммунная реакция.

Предыдущее подвергание подобным или связанным белкам

Предыдущее терапия подобными или сходными белками может привести к пре-сенсибилизации и вызвать иммунный ответ. Для некоторых белков, используемых для заместительной терапии, предыдущие методы лечения могут стать причиной возникновения индуцированных кросс-реактивных антител или иммунологической памяти, которые влияют на последующие методы лечения.

4.1.2. Факторы риска иммуногенности, связанные с продуктом

Факторы риска, связанные с продуктом, влияющие на иммуногенность биологически/биотехнологически полученные терапевтические белки, включают происхождение и природу активной субстанции (структурное сходство, посттрансляционные модификации), модификация исходного белка (например, пегилирование), примеси, связанные с продутом или процессами (например, продукты распада, агрегаты и белки клеток хозяина, липиды или ДНК), и состав.

Структура белка

Полученные биотехнологическими методами аналоги человеческих эндогенных белков могут вызывать иммунную реакцию из-за различий в последовательности аминокислот или изменениях в структуре белка в результате пост-трансляционных модификаций, физической, химической или ферментативной деградации и/или модификации, например, дезаминирование, окисление и сульфатирование во время всех этапов производственного процесса и во время хранения. Гибридные белки, составленные из чужеродных и собственных белков, вызывают особое беспокойство из-за потенциальной способности чужеродной части вызывать иммунную реакцию на собственный белок (распределение эпитопов). Рекомендуется идентификация аллергенной половины белка. Гликозилирование является частой пост-трансляционной модификацией для полученных биотехнологическим способом терапевтических белков. Эти модификации могут различаться по количеству и расположению локаций гликозилирования а также последовательности, длине цепи и слайсингу присоединенного олигосахарида. Поэтому, когда тот же самый белок производится при различных условиях (например, изменение в процессе приготовления клеточной культуры) могут происходить изменения в картине пост-трансляционных модификаций и иммуногенного потенциала белка. Это также означает, что антитела, индуцированные одним продуктом, могут по-другому реагировать с аналогичным продуктом, произведенном при измененных условиях. Это, возможно, придется учитывать для оценки иммуногенности.

• Состав

Состав препарата выбирается с таким расчетом, чтобы лучше всего поддержать собственную структуру терапевтического белка. Устойчивая эффективная формула зависит от понимания физической и химической природы действующего вещества, вспомогательных веществ и их взаимодействия. Состав и источник вспомогательных веществ могут изменить иммуногенность терапевтических белков и должны рассматриваться в качестве возможной причины подобных явлений. Это нужно учитывать и при внесении изменений в состав.

Влияние первичной упаковки и условия клинического использования например, растворение в инфузионных растворах и приборах для инфузий из различных материалов, также могут влиять на иммуногенность терапевтического белка.

Агрегация и формирование аддукта

Агрегация и формирование аддукта белков могут либо указывать на новые антигенные детерминанты или привести к формированию мультивалентных антигенных детерминант, которые могут стимулировать иммунную систему. Факторы, которые нужно учитывать в качестве способствующих агрегации и формированию аддукта: процессы очистки, процедуры инактивации вирусов, условия хранения промежуточных продуктов и готового продукта. Использование белков, например, альбуминов, в качестве вспомогательных веществ может привести к формированию большего количества иммуногенных агрегатов. Важно контролировать содержание агрегатов и аддукта на всем протяжении срока годности.

Примеси

Существует ряд примесей терапевтических белков, которые потенциально могут служить адъювантами.

Белки клетки - хозяина (HCPs) из клеточного субстрата, совместно очищенного с активным веществом, могли вызвать иммунные реакции против самих себя. Но также возможно, что эти HCPs, например, полученные из клетки - хозяина липиды или ДНК, функционируют как адъюванты для представляющего интерес белка.

4.2 Неклиническая оценка иммуногенности и ее последствий

Терапевтические белки в большинстве случаев различаются в зависимости от особей. Так, человеческие белки в организме животных будут являться инородными. По этой причине предикативность неклинических исследований для оценки иммуногенности считается низкой. Обычно проведение неклинических исследований с целью прогноза иммуногенности на людях обычно не требуются. Однако пристальное внимание должно уделяться использованию появляющихся технологии (инновационные тесты на моделях in vivo, in vitro и in silico), которые могут использоваться для проведения оценки.

Измерение антител в неклинических исследованиях, однако, является обязательным как часть повторных исследований токсичности дозы, чтобы помочь в интерпретации этих исследований (как описано в «Примечании к руководству по доклинической оценке безопасности фармацевтических, препаратов полученных биотехнологическими методами» ICH S 6).

Кроме того, сравнение ответа антитела с референс-продуктом на модели животных может быть частью оценки сопоставимости для обоих биоподобных лекарственных продуктов (см. Директиву по биоподобным лекарственным продуктам, содержащим в качестве действующего вещества белки, полученные биотехнологическими методами: Неклинические и клинические аспекты CHMP/42831/05 и соответствующие приложения) и для изменений в производственных процессах (см. Директиву по сравнимости лекарственных полученных биотехнологическими методами продуктов после изменений в производственном процессе – Неклинические и клинические аспекты CHMP/BMWP/202695/06).

Иммунная реакция на терапевтический белок, представляющий собой аналог эндогенного белка, может выражаться в кросс-реактивности, направленной на эндогенный белок в случае, если эндогенный белок все еще вырабатывается. Любые известные случая возникновения иммунной реакции на эндогенный белок или его отсутствие/дисфункция в моделях животных должны обсуждаться. Необходимо учитывать и гуморальные и клеточные иммунные реакции (если применимо). В отсутствие подобных данных, а также, если теоретические соображения наводят на мысль о риске для безопасности, можно рассмотреть возможность исследованиях иммунизации животных с терапевтическим белком или гомологи животных, чтобы получить информацию о потенциальных последствиях нежелательного иммунного ответа.

4.3 Разработка испытаний для определения и измерения иммунных реакций на людях.

Нежелательная иммуногенность, вызванная биопрепаратами, может включить гуморальный и клеточный иммунный ответы. Поэтому очень важно выбрать и/или разработать испытание и стратегию испытания для оценки таких иммунных реакций. Большинство усилий обычно направлено на обнаружение и характеристику антитела, так как это технически выполнимо и часто связано с клинической безопасностью и эффективностью. Однако клеточно-опосредованные реакции могут играть важную роль и возможность их оценки может быть рассмотрена заявителями на индивидуальной основе.

4.3.1 Стратегия испытания

Важно принять правильную стратегию оценки нежелательной иммуногенности биологических продуктов. Это обычно должно включать скрининговое исследование для идентификации положительного антитела в образцах/у пациентов, аналитические иммунохимические процедуры по подтверждению присутствия антител и определение специфики антител и функциональных испытаний для оценки нейтрализующей способности антител. Кроме того, оценка не антител включает, например, испытание на соответствующие биомаркеры или необходимость фармакокинетических измерений, которые позволят оценить и охарактеризовать клиническое влияние антител, возможно, других компонентов иммунных реакций), если они обнаружены/индуктированы. Это важный для того, чтобы включать основные данные, полученные от всех пациентов, где применимо.

Приложение 2 показывает пример возможной стратегии обнаружения антитела и характеристики.

4.3.2 Анализ антител

• Скрининговые исследования

Скрининговые исследования должно помогать обнаружению антител, вызванных биологическим продуктом во всех антител-положительных образцах/пациентах. Это подразумевает, что обнаружение некоторых ложно-положительных результатов неизбежно, поскольку обычно специфика скрининга заключается в том, что нужно избегать недосягаемых и ложно- отрицательных результатов. Желаемыми характеристиками скринингового исследования являются: чувствительность, специфичность, точность, воспроизводимость и надежность.

Испытание на присутствие антител

Это испытание необходимо для исключения ложно-положительных образцов/пациентов после первичного скрининга. Для этого могут быть приняты различные подходы, однако необходимо выбрать такие, которые учитывают ограничения и характеристики скринингового анализа. Для подтверждения специфичности, обычно не достаточно просто повторить скрининг в его первоначальной форме.

Определение специфичности антител

Испытания, которые обеспечивают информацию относительно специфики обнаруженных антител, могут быть полезными в некоторых случаях. Эти данные способствуют подтверждению специфики иммунной реакции.

Оценка нейтрализующей способности

Оценка нейтрализующей способности антител обычно требует использования биоанализа. Испытание должно быть выбрано или разработано с учетом хорошего ответа на биологический продукт. Биоанализ используется для того, чтобы измерить потенцию биологических продуктов, например, может применяться в целях выпуска партии его часто применяют, чтобы оценить нейтрализующую способность антител. Однако, часто они требуют очистки, если они должны быть оптимальными для измерения способности антител к нейтрализации. Если клеточный анализ нейтрализации не выполним/не доступен, может использоваться метод связывания лиганда или другие альтернативы. Однако, при их использовании, нужно продемонстрировать, что они отражают способность/потенциал нейтрализации в соответствующая манере.

4.3.3 Валидация испытаний

Валидация испытаний - продолжающийся процесс во время разработки продукта. Тексты, использующиеся для базовых клинических испытаний, должны быть утверждены для намеченной цели. Валидация испытаний должна быть проведена, чтобы установить, что испытание дает надлежащие линейные, зависящие от концентрации реакции на соответствующее исследуемое вещество, а так же имеет надлежающую точность, верность, чувствительность, специфику и надежность. Для базовых клинических испытаний может быть полезным использование центральной лаборатории, чтобы избежать межлабораторных различий. В постмаркетинговый период также важно учитывать межлабораторные различия.

Испытание также должно быть утверждено, чтобы показать что матричные эффекты, вызванные реактивами или веществами, существующими в образце не оказывают негативного влияния на полученные результаты. Это обычно относится к «восстановительным» исследованиям, проводимым, наблюдая эффекты таких веществ, в матрице на реакцию в их отсутствие. Это должно быть проведено для полного спектра разведений образцов, которые должны использоваться в испытании, и, по крайней мере в некоторых случаях, ограничивает число разведений, которые могут быть оценены с точки зрения валидации.

Остаточный биологический продукт, существующий в крови пациентов, может образовать комплекс с индуцированным антителом и следовательно уменьшить количество антител, обнаруживаемых испытанием. Это может по-разному повлиять на испытания, в зависимости от самого испытания, формата испытания или типа и особенностей антитела. Если так случается, это можно обойти/решить использованием многих подходов, например, отделяя свободные комплексы с кислотой, удаляя избыток, биологической адсорбцией твердой фазы, использованием долговременной инкубации и/или использованием испытаний, которые позволяют достаточному стандартному растворению избегать этой проблемы. Такие подходы должны непосредственно быть отвалидированы по показателям эффективности и использоваться в зависимости от конкретного случая при необходимости. В некоторых случаях эту проблему можно преодолеть соответствующим выбором интервала времени между введением продукта и взятия пробы для оценки антител, то есть за это время позволить продукту быть очищенным от циркулирования перед взятием образца. Однако этот последний подход не должен значительно влиять на обнаружение антител или на лечение пациента.

Стандартизация и средства управления

Испытание должно быть стандартизировано, и это требует идентификации и/или разработки соответствующих справочных материалов, то есть использование соответствующих биологических стандартов и/или хорошо зарекомендованного положительного и отрицательного контроля. Эти реактивы функционируют как критические реактивы испытания и важны для испытания, калибровки и валидации. Это особенно важно для испытания, используемого в исследованиях нежелательной иммуногенности, поскольку глубоко связано с интерпретацией испытания и с различением образцов антител-положительных от антител-отрицательных.

4.3.4 Характеристика антител к терапевтическому белку

Если антитела обнаружены у пациентов, проходящих терапию, они должны быть охарактеризованы с целью установления их клинического значения. Это обычно включает иммунологическую и/или биологическую оценку особенностей антител и исследование эффектов антител (или что-то иное, вызвавшее иммунный ответ) на продукте. Некоторые могут относиться к испытанию не на антитела как часть in vitro исследований, но это так же может потребовать клинической оценки пациентов, получающих терапию.

Характеристики антител

Если у пациента появляются антитела, образцы сыворотки или плазмы должны быть охарактеризованы с точки зрения содержания антител (концентрация/титр), нейтрализующей способности и, возможно, другие критерии определенные в каждом индивидуальном случае в зависимости от биологического продукта, типа пациентов, целей исследования, клинических симптомов и, возможно, других факторов. Это может включать класс и подкласс (изотип) антител, сродство, специфику. Количество и полнота требуемых характеристик может отличаться в зависимости от целей исследования и стадии разработки продукта. Используемое испытание должно быть пригодно для намеченной цели.

Антитела в подтвержденных положительных образцах, должны быть исследованы на специфику к активному белку и, если применимо, их необходимо отличить от антител, которые связаны с компонентами, связанным с продуктом и с процессом. Было показано, что антитела могут возникать в результате любой из перечисленных причин. Также полезно проводить тест на кросс реактивность с другими продуктами, основанный на конкретном белке, а так же (если применимо) на его эндогенном аналоге.

Нейтрализующая способность антител, присутствующих в положительных образцах, должна быть установлена, т.к. она часто коррелирует с ослаблением клинического ответа на биологический продукт. В некоторых случаях важен скрининг нейтрализующих образцов для кросс- нейтрализации других продуктов, основанный на том же самом белке и эндогенном белке, поскольку это может иметь значение для клинической эффективности и безопасности. Необходимо отметить, что нейтрализующая способность не обязательно коррелирует с содержанием антитела, то есть образцы, содержащие существенное или большое количество обязательных антител, могут быть не в состоянии нейтрализовать биологическую активность, тогда как образцы, содержащие более низкое количество антител, могут нейтрализовать разнообразное (в зависимости от образца) количество. Это может зависеть от продукта, но должно быть определено опытным путем.

• Стратегия оценки иммуногенности - дизайн и интерпретация

Исследования иммуногенности должны быть тщательно и скурпулезно разработаны, чтобы гарантировать проведение всех необходимых процедур перед началом клинической оценки. Это включает выбор, оценку и характеристику испытания, идентификацию соответствующих пунктов осуществления отбора образцов, объемы и обработка/хранение образцов, а также выбор статистических методов для анализа данных. Это относится к испытаниям, используемым для измерения и характеристики антител, а также к методам, используемым для того, чтобы оценить клинические ответы на антитела, если они присутствуют. Большая часть этого должна быть установлена на индивидуальном порядке, принимая во внимание сам продукт, характеристики пациентов и ожидаемые клинические параметры. Такие исследования могут дать ценную информацию относительно значения иммуногенности биологических продуктов, особенностей и потенциальных клинических последствий. Они могут иметь ценность для сравнительных исследований иммуногенности для биоподобных продуктов или после введенных изменений в производстве/процессе для установленных продуктов. Однако нежелательный иммуногенная реакция может произойти на уровне, который не будет обнаруживаться такими исследованиями на стадии перед утверждением, в связи с ограниченным числом пациентов для исследования. Ввиду этого часто необходимо продолжить оценку нежелательной иммуногенности и ее клиническое значения в пострегистрационный период, обычно это является частью фармаконадзора. В некоторых случаях клинические исследования в пострегистрационный период могут быть необходимы для установления риска, связанного с нежелательной иммунной реакцией.

Для получения дальнейшей информации по методам оценки и характеристики иммуногенности см. Приложение 1.

4.4 Потенциальные клинические последствия иммуногенности

4.4.1 Влияние на эффективность

Факторы, которые влияют на то, вызовут ли антитела к терапевтическому белку клинические последствия, включают распознанную антигенную детерминанту, сродство, класс антитела, количество произведенных антител и фармакологические свойства биотехнологического лекарственного продукта. Кроме того, способность иммунных комплексов активизировать дополнение или быть очищенными могут быть фактором, который воздействует на клинический результат. "Нейтрализация" антител, имеющих отношение к биологической активности, связыванием с или возле активного участка или путем индукции конформационных изменений, может вызвать потерю эффективности. Отделение нейтрализующих антител от подтвержденных положительных и используемое испытание, должны быть надлежащими (см. раздел 4.3). Наиболее важно, чтобы анализ нейтрализующих антител был способен к обнаружению клинически соответствующих нейтрализующих антител. Корреляция особенностей антител с клиническими ответами требует сравнения данных испытания, определяющего ответы антитела (см. выше) с результатами, полученными, используя образцы от пациентов и испытания, разработанные для того, чтобы оценить клинические ответы. Большинство последних являются специфичными для конкретного продукта, например, оценка увеличения числа лейкоцитов колониестимулирующими факторами, или увеличение числа ретикулоцитов эритропоэтином. Такое испытание должно выбираться согласно продукту и потребностям. Во многих случаях, бывает трудно идентифицировать клиническую конечную точку, которая достаточно чувствительна, чтобы установить непосредственное воздействие на клинические результаты, в этом случае решением может стать замена измерения метода ответа, например на биомаркеры / фармакодинамические маркеры. Выбор таких маркеров должен быть обоснован. In vivo сравнение клинических реакций пациента на продукт до и после индукции антитела может дать информацию о корреляции между развитием антитела (и особенностями антитела) и клиническими реакциями. Это может быть сделано либо анализом внутри группы (реакции у пациентов до и после возникновения антител) или в сравнении с пациентами в рамках исследования, у которых не наблюдалось развитие иммунной реакции.

4.4.2 Влияние на безопасность

Потеря эффективности и изменение профиля безопасности не обязательно связаны. Проблемы безопасности, например, реакции, связанные с инфузиями, могут произойти и без потери эффективности.

• Острые последствия

Обычно, более вероятны связанные с инфузиями реакции для пациентов, у которых развивается выработка антител. Острые реакции на инфузии, включая анафилактические реакции, могут развиться в течение нескольких секунд или в пределах нескольких часов после инфузии. Заявители должны дифференцировать понятия “реакция на инфузию и "анафилаксия" и тщательно определить, какие симптомы указать как “связанные с инфузией реакции”. “Реакции на инфузию” обычно симптоматически проявляются в скором времени после инфузии и не обязательно связаны с анафилаксией или даже гиперсенсибилизацией. Однако острые реакции могут действительно иметь аллергическую природу, а именно, IgE-опосредованные реакции типа I (анафилактические реакции), включая гипотонию, бронхоспазм, отек гортани или глотки, свистящее дыхание и/или крапивница. Термин "анафилаксия" должен быть ограничен такими ситуациями и является строгим противопоказанием к дальнейшему применению препарата. Однако большинство инфузионных реакций характеризуются более неспецифическими признаками, для некоторых продуктов они чаще происходят при первоначальном воздействии, иногда менее частые/серьезные реакции наблюдаются при повторном воздействии. Инфузии могут не иметь противопоказаний для дальнейшего применения. Был описан диапазон симптомов, относящихся к инфузиям, включая головную боль, тошноту, лихорадку или озноб, головокружение, покраснение лица, зуд, боль в груди или в пояснице. Установлено, что определить взаимосвязь между инфузией и анафилаксией может быть непросто, однако установить ее необходимо в связи с различными клиническими последствиями.

Заявители должны не только сосредоточиться на инфузионных реакциях и анафилактических симптомах, так как последствия иммуногенности являются специфичными для продукта и могут вызвать неожиданные клинические проявления.

• Неострые последствия

Аллергическая реакция замедленного типа и иммунные комплексы

Помимо острых реакций необходимо рассмотреть аллергические реакции замедленного типа (опосредованные T-клетками) и иммунные комплексы. Риск таких реакций может быть выше с увеличением интервала времени, когда лекарственное средство не применялось. Аллергические реакции замедленного типа должны быть ясно отделены от реакций на инфузии. Заявители должны обеспечить систематический сбор данных о неострых клинических осложнениях после применения терапевтического белка. Клинические проявления могут включать миалгию, артралгию с лихорадкой, кожную сыпь, зуд и т.д. Но данные о других другие, менее очевидных клинических проявлениях, также должны систематически собираться.

Помимо влияния на фармакологические характеристики, иммунные комплексы могут потенциально депонироваться в тканях. Основное заболевание и потенциальное влияние иммунных комплексов на дальнейший клинический курс необходимо рассмотреть и критически оценить, например, потенциальное ухудшение функции почек у пациентов с основным аутоиммунным заболеванием.

Кросс-реактивность с эндогенным аналогом

Антитела, развивающиеся против терапевтических белков с эндогенными аналогами, могут иметь кросс-реактивность с этим эндогенным аналогом в случаях, где если он все еще производится (например, эритропоэтины). Поэтому частью обязательной программы в предрегистрационный период должна стать всесторонняя характеристика ответа антитела, включая кросс-фиксацию и тщательное наблюдение за клиническими последствиями. Полезным может стать предыдущий опыт с подобными продуктами однако, этого не достаточно.

Заявители, разрабатывающие такие структуры как гибридные молекулы, соединенные с физиологически функциональными молекулами, должны тщательно рассмотреть потенциальные последствия кросс-реактивности антител на все эндогенные (или собственные) компоненты.

4.5 Иммуногенность и Клиническая разработка

4.5.1 Обоснование плана отбора образцов и кинетики ответа антитела

Оценка иммуногенности должна быть частью клинических испытаний, поскольку корреляция с клинической эффективностью и безопасностью очень важна. Для клинических испытаний Заявителям рекомендуется оценить иммуногенность у всех пациентов, а не только в связи с симптомами (то есть только для тех пациентов, у которых подозревается изменение в профиле безопасности или эффективности). Однако помимо запланированного стандартного повторного отбора образцов, пациенты должны также быть оценены в связи с симптомами с дополнительными образцами, если подозревается возникновение нежелательной иммунной реакции.

Некоторые факторы, такие как дозировка, график приема и особенности применения влияют на развитие иммунной реакции против терапевтического белка (см. 4.1). Поэтому план отбора образцов для обнаружения иммунной реакции должен быть отобран индивидуально для каждого продукта, учитывая также его фармакокинетику. Основные образцы всегда должны отбираться. Общая частота иммуногенности должна быть оценена для данного продукта по всем признакам, таким образом, планы отбора образцов предпочтительно должны быть сопоставимыми с различными испытаниями, чтобы позволить напрямую сравнить частоту возникновения антител, направленных против лекарственного средства. Отклонения от этой концепции должны быть обоснованы. Заявители должны пытаться стандартизировать план отбора образцов, испытания, определения, и т.д., учитывая предыдущий опыт с сопоставимыми продуктами. Во время проведения терапии образцы должны всегда браться перед введением продукта, так как остаточные уровни активного вещества в плазме могут помешать чистоте испытания (см. раздел 4.3). Соответствующие условия для хранения и отгрузки образцов должны быть установлены и обеспечены, чтобы гарантировать соответствующее качество испытательного материала.

Частота осуществления выборки и количества исследований будет также зависеть от риска, определенного для конкретного препарата, и клинических последствий, и должна быть обоснована. Планы отбора образцов должны включать повторное осуществление выборки и быть разработаны таким образом, чтобы четко разделять пациентов со случайно-положительными результатами от пациентов с постоянным иммунным ответом. Обе этих категории должны быть объединены, чтобы определить полную иммуногенность продукта при данных условиях. В частности постоянный иммунный ответ имеет высокое значение, поскольку для пациентов с постоянным иммунным ответом существует большая вероятность клинических осложнений с точки зрения безопасности и эффективности, в то время как случайный иммунный ответ может пройти без последствий.

Для продуктов, предназначенных для постоянного применения, может быть необходимо изучить развитие и постоянство наблюдаемой иммунной реакции. Необходимо собрать данные по потенциальным изменениям в характере ответа антитела в течение длительного времени, например, изменения от отсутствия нейтрализации до нейтрализации у конкретного пациента, если применимо. В зависимости от конкретного случая, например, при оценке риска, необходимо рассмотреть потенциальные долгосрочные последствия нежелательной иммунной реакции, планируя клиническую программу оценки иммуногенности. Более частое осуществление выборки обычно проводится в более ранней фазе обращения, где пациенты обычно наиболее подвержены опасности возникновения антител. Так как долгосрочное применение более вероятно приведет к иммунной реакции, в клинических испытаниях должен применяться стандартный отбор образцов. В случае непрерывного постоянного применения, обычно должны быть доступны данные об иммуногенности в течение одного года применения для предварительного утверждения. Отклонения должны быть полностью оправданы, например, более короткие терапия или различия, касающиеся объема данных для различных путей введения. Если препарат предназначен для различных путей введения, заявители должны обосновать свой подход, касательно оценки иммуногенности для каждого пути введения во время подачи заявления на получение регистрационного удостоверения. В зависимости от лекарственного продукта и потенциальных рисков, связанных с возникновением нежелательной иммунной реакции, может быть важно охватить достаточное число воздействий.

Если применимо, осуществление выборки должно также быть сделано после завершения терапии, с целью определения постоянства ответа. В то время как увеличение антител в ответ на лекарственное средство может происходить у пациентов с течением времени с первоначально положительной для таких антител реакцией, но также увеличение количества антител может произойти, например, если у терапевтического белка есть иммуносупрессивные свойства и его механизм действия подавляет иммунный ответ против себя.

Если применимо и возможно, Заявители должны предоставить руководство для медицинского работника, имеющего право назначать рецептурные препараты, как часть заявления на выдачу регистрационного удостоверения, о том, как в течение времени проводить терапию у пациентов с эффектом потери эффективности, например, увеличение дозы или уменьшение интервала приема или прекращение терапии.

Результаты иммунологических исследований должны быть включены в соответствующие разделы Краткой характеристики лекарственного средства.

4.5.2 Влияние на фармакокинетику продукта

Эпитопы, распознающие антитела на терапевтические белки, не имеющие отношение к активности, меньше связаны с клиническими последствиями. Тем не менее, такие антитела могут влиять на фармакокинетику и, таким образом, влиять на эффективность. "выводящие" антитела могут быть нейтрализующими или не-нейтрализующими, и могут снижать эффективность путем удаления терапевтических белков из обращения. Не-нейтрализующие «связывающие» антитела также могут иногда увеличиваться, а не снижаться, эффективность продукта путем продления периода полураспада, или стимулирования направления или механизма. Нейтрализующие антитела могут инактивировать препарат с или без выведения. Потеря эффективности может быть охарактеризована в Стратегии Анализа, описанной в разделе 4.3, как требуется. Изменения в фармакокинетике могут быть ранним признаком образования антител. Если антитела обнаруживаются в ходе клинических программ, их возможное воздействие на фармакокинетику должно быть изучено (см. также Руководство по клиническому исследованию фармакокинетики терапевтических белков).

4.5.3 Методологические аспекты оценки сопоставимости иммуногенного потенциала как часть анализа сопоставимости

Существуют данные, что изменения в производственном процессе могут вызывать изменения иммуногенных свойств продукта. Когда происходят изменения в процессе производства лицензированного продукта, анализа сопоставимости является поэтапным подходом (см. Руководство по сопоставимости лекарственных средств, полученных биотехнологическими методами, после внесения изменений в процесс производства). Если начальные физико-химические и биологические испытания указывает на разницу до и после изменений в отношении продукта, необходимо учитывать потенциальные последствия для безопасности и эффективности, в том числе изменения в иммуногенности. Даже тогда, когда начальные физико-химические и биологические испытания не указывают на какую-либо разницу, должен учитываться потенциал для изменения иммуногенности, не выявленный такими тестами.

При необходимости стоит провести расширенные исследования иммуногенности, основанные на анализе рисков и учитывающие природу наблюдаемых различий, потенциальных клинических последствий, и опыт, полученный с этим продуктом и аналогичным продуктом. Определение соответствующей группы, на которую направлено воздействие, следует проводить с учетом того, где лучше всего обнаружить различия, не ограничиваясь только иммуногенностью.

Заявители должны выбрать однородные и клинически значимые группы пациентов, что позволит проводить подобные сравнения. Из-за ожидаемой дифференциальной восприимчивости, данные об иммуногенности у здоровых добровольцев не являются адекватной заменой. Для большинства продуктов, иммуногенность изучается на пациентах, ранее получавших терапию, и включается в клиническое исследование, чтобы установить, что изменения в производственном процессе не имели негативного влияния на эффективность и безопасность. В оценку иммуногенности в рамках клинических испытаний для анализа сопоставимости желательно включать прямое сравнительное исследование до и после изменений, касающихся продукта. Должны быть использованы одинаковые тесты.

Изменения в иммуногенности в результате изменений в процессе производства может потребовать конкретной стратегии управления рисками и обновление плана управления рисками (см. раздел 4.6). Если существует риск редких побочных эффектов, вызванных иммунным ответом, это может быть рассмотрено после внесения изменений в постмаркетинговые параметры.

4.5.4 Иммуногенность в педиатрической практике

Терапевтические белки находят все большее применение у детей. Следует учитывать, что дети могут отличаться от взрослых иммунным ответом.

При изучении продукта в педиатрической практике, дозировки и схемы лечения должны быть соответственно выбраны и обоснованы. При необходимости и возможности, результаты должны быть проанализированы по возрастным группам и данные по иммуногенности должны быть оценены и представлены отдельно для каждой возрастной группы для потенциального выявления уязвимых возрастных групп.

Что касается заместительной терапии, рекомбинантные технологии позволили разработать белки для применения при генетических нарушениях, где предыдущие заместительная терапия не была доступна. Дети являются наиболее подходящей группой для воздействия этих продуктов и могут быть связаны с высоким риском развития антител.

4.6 План управления рисками

В подаче на получение регистрационного удостоверения, заявитель должен предоставить план управления рисками в соответствии с действующим законодательством ЕС и руководствами по фармаконадзору, включая CHMP Руководство по системам управления рисками, связанными с медицинскими продуктам для использования у человека (EMEA/CHMP/96268/2005). Иммуногенность всегда должна быть рассмотрены в рамках управления рисками. План (РМП) должен учитывать риски, выявленные в ходе разработки продукта, а также потенциальные риски и последствия нежелательного иммунного ответа для пациентов. Спецификация и минимизация рисков должна соответствовать принципам, изложенным в данном руководстве. Опять же, следует подчеркнуть, что оценка иммуногенности является междисциплинарным подходом, наилучшим образом отражающемся на качестве, доклинических и клинических анализах.

Объем данных по иммуногенности, которые должны быть получены в ходе клинической разработки программы для продуктов, полученных биотехнологическим путем, до утверждения, зависит от степени реакции, зависящей как от иммуногенного потенциала белка, так и от редкости заболевания. Таким образом, дальнейшее систематическое тестирование иммуногенности может стать необходимым после того, как получено регистрационное удостоверение, и может быть включено в План управления рисками.

Расширенные данные по иммуногенности должны быть собраны в пост-маркетинговые установки и зависят от различных факторов, в том числе:

• Факторы, связанные, с болезнью, такие как его распространенность, восприимчивость пациентов, наличие альтернативных методов лечения, продолжительность лечения и т.д.

• Предварительное утверждение результатов иммуногенности, в том числе влияние на эффективность и безопасность

• Опыт по иммуногенности с аналогичными белками или соответствующими представителями данного класса белков, в том числе белков, производящихся в аналогичных условиях процесса производства.

• Серьезность иммунной реакции.

Тем не менее, биотехнологические производные белков должны рассматриваться индивидуально, и, следовательно, возможность экстраполяции от других соответствующих белков ограничена и должна быть полностью обоснована.

Иммуногенность может быть дополнительно изучена в постмаркетинговых параметрах, например, увеличением отчетности о возможных побочных эффектах, связанных с иммунным ответом (в том числе потерей эффективности), или фармакоэпидемиологических исследованиях.

MAH следует создать стандартизированный алгоритм по вопросам дальнейшего расследования случаев возможного иммунного ответа, в том числе, как подтверждение выработки антител в данном случае.

Он должны включать:

• Выявление рисков и характеристику (например, определение случаев, антитела, тесты);

• Мониторинг рисков (например, конкретные пределы, чтобы связать риск с продуктом);

• Минимизация рисков и снижение последствий стратегий (например, ограничиться внутривенного введения, при необходимости, меры, предложенные в ответ на обнаруженные риск и т.д.);

• Риск коммуникаций (например, минимизация и смягчение сообщения для пациентов и врачей, связь с врачами в том, что касается получения доступа к конкретным инструментам расследования, таким как анализ антител);

• Мониторинг деятельности по обеспечению эффективности минимизации рисков.

Заявители должны реагировать на изменения в данных по иммуногенности, принимая соответствующие меры, например, изменениях в информации о продукте, обновление досье и другие мероприятия по минимизации риска (например,образовательные программы и т.д.).

ССЫЛКИ

• Note for guidance on pharmaceutical development (ICH Q8 Step 4)

• Note for guidance on preclinical safety evaluation of biotechnology-derived pharmaceuticals (ICH

S6)

• Similar biological medicinal products containing biotechnology-derived proteins as active

substance: Non-clinical and clinical issues. (CHMP/42831/05)

• Guideline on comparability of biotechnology-derived medicinal products after a change in the

manufacturing process. Non-clinical and clinical issues. (CHMP/BMWP/101695/2006)

• Guideline on the Clinical Investigation of the Pharmacokinetics of Therapeutic Proteins

(CHMP/EWP/89249/2004).

• Clinical Investigation of Human Plasma Derived Factor VIII and IX Products

(CPMP/BPWG/198/95)

• Clinical Investigation of Recombinant Factor VIII and IX Products (CPMP/BPWG/1561/99).