Руководство по препаратам аллергенов: вопросы производства и контроля качества

РУКОВОДСТВО ПО ПРЕПАРАТАМ АЛЛЕРГЕНОВ: ВОПРОСЫ ПРОИЗВОДСТВА И КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА

СОДЕРЖАНИЕ

КРАТКИЙ ОБЗОР……………………………………………………………..………………

1. ВВЕДЕНИЕ (общие сведения).......................................................................................…...

2. СФЕРА ДЕЙСТВИЯ ……………………………………………………………………….

3. НОРМАТИВНО-ПРАВОВАЯ ОСНОВА…………………………………………………

4. ОСНОВНОЙ ТЕКСТ РУКОВОДСТВА......................................................................…...

4.1. ОБЩИЕ ВОПРОСЫ………………………………………………………………………

4.1.1. Гомологичные группы……………………………………………………………….......

4.1.2. Смеси аллергенов……………………………………………………………………........

4.1.3. Сопоставимость…………………………………………………………………………..

4.2. АКТИВНАЯ СУБСТАНЦИЯ……………………………………………………..……..

4.2.1. Общая информация………………………………………………………………...……..

4.2.2. Производство………………………………………………………….…………………..

4.2.2.1. Производство активной субстанции, получаемой из натурального сырья биологического происхождения……………………………………………………………….

4.2.2.2. Производство активной субстанции, получаемой при помощи технологии рекомбинантной ДНК …………..................................................................................................

4.2.3. Контроль материалов…………………………………………………………………......

4.2.3.1. Контроль исходных материалов, используемых для получения экстрактов аллергенов……………………..…………………….……………………………………………

4.2.3.2. Контроль исходных материалов, используемых для изготовления рекомбинантных аллергенов…………………………………………………………………………………………

4.2.3.3. Контроль сырья…………………………………………………………….......................

4.2.4. Описание характеристик и контроль действующего вещества………………………….

4.2.4.1. Описание характеристик и контроль экстрактов аллергенов………………………….

4.2.4.2. Описание характеристик и контроль рекомбинантных аллергенов..……………........

4.2.4.3. Описание характеристик и контроль препаратов модифицированных аллергенов....

4.2.4.4. Оценка активности ………………………………………………………...……….........

4.2.5. Стабильность………………………………………………………………………………..

4.3. СТАНДАРТНЫЕ ОБРАЗЦЫ И МАТЕРИАЛЫ ………………………………...…………

4.4. ГОТОВЫЙ ПРОДУКТ …………………………………………………………………….

4.4.1. Описание и состав готового продукта …………………………………............................

4.4.2. Производство……………………………………………………………………………….

4.4.3. Контроль готового препарата…….……………………………………………………….

4.4.4. Система упаковки/укупорки……………………………………………………………….

4.4.5. Стабильность……………………………………………………………………….……….

ОПРЕДЕЛЕНИЯ…………………………………………………………………….…….……..

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ (научные и/или нормативные источники)……….…………..

ПРИЛОЖЕНИЕ 1 – Предлагаемые гомологичные группы……………………………….

КРАТКИЙ ОБЗОР

Настоящее руководство содержит рекомендации по контролю качества препаратов аллергенов биологического происхождения, в том числе экстрактов аллергенов, получаемых из сырья природного происхождения, и аллергенов, производимых при помощи технологии рекомбинантной ДНК, используемых для специфической иммунотерапии (СИТ) или in vivo диагностики аллергических заболеваний, опосредованных иммуноглобулином Е (IgE).

1. ВВЕДЕНИЕ (общие сведения)

Аллергия – это заболевание, являющееся следствием реакций гиперчувствительности I типа, которые представляют собой сильные реакции иммунной системы, вызванные взаимодействием аллергенов со специфическими антителами IgE, в результате которого происходит выброс медиаторов воспаления, таких как гистамин, цитокины и липидные медиаторы. Аллергии являются одним из самых распространенных заболеваний в Европе. В то время как важную роль в клинической диагностике аллергии играют диагностические аллергены, СИТ с применением препаратов аллергенов, содержащих те же самые антигены, является вариантом иммуномодулирующего лечения, направленного на долгосрочное облегчение симптомов аллергии

В предыдущих «Руководящих указаниях по препаратам аллергенов» (CPMP/BWP/243/96), а также в монографии Европейской Фармакопеи по препаратам аллергенов (1063) рассматриваются технические вопросы качества препаратов аллергенов на основе экстрактов аллергенов. В последние годы все больше препаратов аллергенов получают при помощи технологии рекомбинантной ДНК. Подобные рекомбинантные белки проходят экспертизу в качестве инновационных терапевтических препаратов в клинических исследованиях СИТ.

2. СФЕРА ДЕЙСТВИЯ

Настоящее руководство содержит принципы и рекомендации, касающиеся производства и контроля качества препаратов аллергенов биологического происхождения, в том числе экстрактов аллергенов, получаемых из сырья природного происхождения, и аллергенов, производимых при помощи технологии рекомбинантной ДНК, используемых для СИТ или in vivo диагностики аллергических заболеваний, опосредованных IgE. Действие руководства распространяется на все препараты аллергенов и промежуточные продукты, производимые при помощи метода, подразумевающего использование промышленных технологий, соответствующих определению, представленному в Директиве 2001/83/EC в последней редакции.

Препараты аллергенов производят из экстрактов аллергенов, аллергоидов, конъюгатов или аллергенов, получаемых при помощи технологии рекомбинантной ДНК. В настоящем руководстве не рассматриваются препараты аллергенов, состоящие из синтетических пептидов, конструктов ДНК или РНК и/или клеточных фракций, или низкомолекулярные химические аллергены.

Настоящий документ также содержит рекомендации, касающиеся утверждения и использования внутренних стандартных препаратов (IHRP), используемых для контроля качества, в том числе анализа постоянства характеристик препарата от серии к серии. Кроме того, в настоящем документе формулируются критерии приготовления смеси сывороток, используемой для измерения активности.

3. НОРМАТИВНО-ПРАВОВАЯ ОСНОВА

Данное Руководство должно рассматриваться во взаимосвязи с введением и основными принципами, а также Частью 2 Приложения I к Директиве 2001/83/EC в последней редакции.

4. ОСНОВНОЙ ТЕКСТ РУКОВОДСТВА

4.1. Общие вопросы

4.1.1. Гомологичные группы

Из-за высокого содержания аллергенов в экстракте аллергена или смеси экстрактов аллергена и перекрестной реактивности отдельных компонентов невозможно определить все значимые параметры для аллергенов в одном конкретном экстракте или смеси экстрактов определенного аллергена. Поэтому в предыдущих «Руководящих указаниях по препаратам аллергенов» (CPMP/BWP/243/96) принципы экстраполяции данных о стабильности между аллергенами, относящимися к одной таксономической категории, были описаны достаточно размыто, и поэтому использовались производителями. Понятие гомологичных групп, вводимое в настоящем документе, заменяет понятие таксономических категорий. Новое понятие ограничивает экстраполяцию группами, которые описаны и обоснованы с использованием научных критериев, позволяет проводить экстраполяцию только по нескольким параметрам и в то же время сохраняет необходимую гибкость подхода.

Экстракты аллергенов, получаемые из разных видов, родов и семейств, а также готовые препараты, которые получают из этих экстрактов, и в отношении которых накоплено достаточно клинических данных, могут объединяться в гомологичные группы.

Объединение в группы должно основываться на следующих критериях:

• Сопоставимые физико-химические и биологические свойства исходного материала;

• Перекрестная реактивность/структурная гомология аллергенов;

• Идентичная лекарственная форма готового препарата;

• Идентичный процесс производства экстракта аллергена и готового препарата.

Для создания группы должны выполняться все четыре критерия.

Один аллерген из гомологичной группы выбирается в качестве репрезентативного вида. Выбор аллергена должен быть обоснован с учетом, например, географических различий в модели сенситизации и других релевантных факторов.

Данные о качестве, безопасности и эффективности могут частично экстраполироваться с репрезентативного источника на остальные аллергены той же гомологичной группы. Для аллергенов, которые не могут быть включены в состав одной гомологичной группы, данные о качестве, безопасности и эффективности должны предоставляться для каждого отдельного препарата.

Всесторонние исследования безопасности требуются только для репрезентативного аллергена, тогда как постмаркетинговые отчеты о безопасности требуются для всех нерепрезентативных аллергенов той же самой группы. Экстраполяция данных клинических исследований рассматривается отдельно в специальном руководстве Рабочей группы по эффективности 1.

Предлагаемые гомологичные группы перечислены в Приложении I. При наличии соответствующего обоснования и при условии выполнения указанных выше критериев заявитель может предложить другие гомологичные группы или включить новые аллергены в уже существующую группу. Приложение I будет обновляться по мере развития научного и технологического прогресса.

4.1.2. Смеси аллергенов

Смеси экстрактов аллергена должны готовиться из индивидуальных экстрактов, получаемых из исходных материалов одного происхождения. Поэтому различные исходные материалы нельзя смешивать до того, как будет осуществляться получение экстракта. Поскольку экстракты считаются активными субстанциями (см. раздел 4.2), каждый отдельный экстракт должен рассматриваться как отдельная активная субстанция. Перед смешиванием необходимо проводить исследование активности каждой отдельной активной субстанции. Суммарная аллергенная активность должна оцениваться для готового лекарственного средства или, если это невыполнимо, для первой гомогенной смеси. Если проведение испытаний каждой отдельной активной субстанции в готовом препарате не представляется возможным из-за перекрестной реактивности компонентов смеси, суммарная аллергенная активность готового препарата должна оцениваться в испытании для оценки конкурентного связывания IgE.

Число экстрактов аллергена в смеси должно быть минимальным, вне зависимости от гомологичности или перекрестной реактивности индивидуальных аллергенов. Число и относительное процентное содержание отдельных активных субстанций должно быть обосновано. Если аллергены, присутствующие в смеси, не принадлежат к одной гомологичной группе, комбинацию компонентов необходимо обосновать.

При составлении смесей экстрактов аллергенов и смесей рекомбинантных аллергенов следует принимать во внимание следующие аспекты:

• Аллергены с протеолитической активностью не должны присутствовать в смеси, если только на это нет надлежащего обоснования.

• Не следует смешивать аллергены многолетних и сезонных растений.

• Аллергены из яда перепончатокрылых насекомых не следует смешивать с другими аллергенами. Не следует смешивать яды, полученные от насекомых различных родов.

4.1.3. Сопоставимость

Разработка препарата аллергена может потребовать внесения таких изменений в процесс производства, которые могут оказывать влияние на готовый препарат. Учитывая сложную природу этих препаратов, особенно важно тщательно изучать и отслеживать все этапы разработки в регистрационном досье, при наличии соответствующей возможности. Заявители должны принимать во внимание поэтапный подход, описанный в руководстве CHMP/ICH 2,3, и рассматривать не только исследования по описанию свойств на уровне активной субстанции, но также валидацию производственного процесса, внутрипроизводственный контроль и данные о стабильности.

4.2. АКТИВНАЯ СУБСТАНЦИЯ

4.2.1. Общая информация

Активная субстанция может быть экстрактом аллергена, а также очищенным природным или рекомбинантным белком; она может быть немодифицированной или модифицированной (например, аллергоиды или конъюгаты, полученные при помощи физических и/или химических методов обработки). Желательно, чтобы активная субстанция была стабильной на последней промежуточной стадии приготовления – до смешивания или получения лекарственной формы. Как правило, адсорбция и добавление вспомогательных веществ считаются этапами получения лекарственной формы.

Экстракты аллергенов, главным образом, состоят из белков и гликопротеинов и содержат различные основные и минорные аллергены, а также неаллергенные компоненты. Ввиду вариабельности, присущей природному сырью, концентрации отдельных аллергенов в подобных экстрактах могут различаться, поэтому очень важную роль играет стандартизация. Активные субстанции, получаемые при помощи технологии рекомбинантной ДНК, состоят из предварительно выбранных аллергенных полипептидов, например, основного аллергена или смеси определенных полипептидов. Можно определить количество и структуру этих полипептидов, и следует описать свойства этих препаратов согласно рекомендациям, представленным в руководствах, касающихся биотехнологических препаратов.

4.2.2. Производство

4.2.2.1. Производство активной субстанции, получаемой из натурального сырья биологического происхождения

Следует подробно описать и валидировать используемые производственные этапы, включая, например, предварительную обработку, экстрагирование, фильтрацию, диализ, концентрацию или лиофилизацию. Данные могут экстраполироваться с репрезентативного вида внутри одной гомологичной группы, при условии, что процесс производства активной субстанции и готового препарата идентичны (см. также раздел 4.4.2). Следует предоставлять в отчетах информацию о методах внутрипроизводственного контроля, в том числе о соответствующих критериях приемлемости. В целях повышения иллюстративности материала следует предоставлять поэтапную диаграмму (технологическую схему), указывающую все этапы процесса, в том числе соответствующий внутрипроизводственный контроль. Если используются асептические меры предосторожности, они также должны быть включены в технологическую схему. В случае с модифицированными экстрактами аллергенов, например аллергоидами или конъюгатами, следует описать процессы модификации. Во время процесса производства необходимо идентифицировать и контролировать промежуточные продукты.

4.2.2.2 Производство активной субстанции, получаемой при помощи технологии рекомбинантной ДНК

В отличие от препаратов аллергенов, получаемых из натурального сырья биологического происхождения, качество отдельных серий аллергенов, получаемых при помощи технологии рекомбинантной ДНК, не варьируется в зависимости от свойств и качества определенного исходного материала, а зависит от используемых систем клеток, процессов ферментации и процедур очистки. Поэтому необходимо тщательно описывать все характеристики используемых клеточных линий и производственного процесса в соответствии с рекомендациями соответствующих руководств.

При производстве рекомбинантных аллергенов следует принимать во внимание все руководства, касающиеся препаратов, получаемых при помощи технологии рекомбинантной ДНК (например, 4-7).

4.2.3. Контроль материалов

В этом разделе речь идет об исходных материалах (сырье) (например, натуральном сырье биологического происхождения, используемом для получения экстрактов аллергенов, и клеточных субстратах, используемых для производства рекомбинантных белков) и первичных материалах (например, растворителях и разбавителях, используемых для экстракции, среде для культивирования клещей или плесневых грибов и среде и реактивах для производства рекомбинантных белков). Если в качестве исходных или первичных материалов используются субстанции животного или человеческого происхождения, необходимо продемонстрировать вирусную безопасность 8,9 и выполнение требований, установленных в отношении трансмиссивной губчатой энцефалопатии (TSE) 10, чтобы избежать риска передачи инфекционных заболеваний.

4.2.3.1. Контроль исходных материалов, используемых для получения экстрактов аллергенов

Необходимо указать наименование (наименования) и адрес поставщика (поставщиков) исходного материала для аллергенов. Описание исходного материала, используемого для получения аллергена, должно содержать всю необходимую информацию. Необходимо указать название (научное название, например, род и вид, а также имеющееся общепринятое название), и тип (например, пыльца и другие растительные материалы, яд насекомых, шкура, перхоть, слюна или пищевые продукты) исходного материала, используемого для получения аллергенов. Для каждого отдельного исходного материала следует предоставить подробную информацию о культивировании, сборе, предварительной обработке (например, этапах облучения) и хранении. Если поставщиком материалов выполняются какие-либо действия по очистке (например, обезжиривание) или другая обработка, эти процедуры должны быть описаны и обоснованы; кроме того, для них должны быть установлены критерии приемлемости. Контроль качества исходных материалов должен документироваться. Следует включать критерии приемлемости и методы контроля исходного материала (материалов), которые должны охватывать требования и методы контроля, касающиеся подлинности и чистоты. Критерии приемлемости должны обеспечивать постоянство характеристик исходного материала, используемого для получения аллергенов – как с точки зрения количественного содержания, так и качества. Исходные материалы должны храниться и транспортироваться в контролируемых условиях, обоснованных данными о стабильности. Если исходные материалы, полученные от разных поставщиков, смешиваются для получения однородных серий исходного материала, следует описать лежащий в основе смешивания принцип. Следует обосновать однородность исходного материала, полученного из различных источников.

Необходимо аттестовать каждый отдельный исходный материал, вне зависимости от того, принадлежит ли одной к одной и той же гомологичной группе.

Дополнительные требования к отдельным исходным материалам:

Пыльца

Следует описать географический район и природу места сбора материалов, характеристики поля, виды обработки, визуальный контроль, способ сбора и процедуры рандомизированного отбора проб. Необходимо предоставить данные о разнообразии используемых растений, в том числе трансгенных растений, если они используются. Использование трансгенных растений должно быть обосновано. Там, где это применимо, следует выполнять рекомендации Руководства по надлежащей практике культивирования и сбора исходного сырья растительного происхождения (GACP) 11 и других применимых руководств, касающихся исходных материалов растительного происхождения 12, 13. Необходимо включать методы испытаний и критерии приемлемости для идентификации и определения содержания таких примесей, как чужеродная пыльца, споры плесневых грибов, чужеродный растительный материал, принадлежащий к тому же самому виду, и неродственные контаминанты.

Следует контролировать и сводить к минимуму содержание релевантных пестицидов, тяжелых металлов и растворителей в исходном материале для аллергенов.

Содержание пыльцы, принадлежащей к другим видам, не должно превышать 1% для смеси пыльцы или 0,5% для пыльцы одного вида, что должно подтверждаться результатами микроскопического анализа количества частиц. Количество поддающихся определению спор плесневых грибов не должно превышать 1% 14. Следует сводить к минимуму контаминацию частицами растительного происхождения, к числу которых не относится пыльца. Необходимо обосновать максимальный допустимый уровень контаминации.

Плесневые грибы

Необходимо указать используемый штамм (штаммы) плесневых грибов, а также морфологию и другие параметры, используемые для описания свойств и идентификации (например, биохимические или генетические свойства), и, кроме того, метод культивирования и вид собираемого исходного сырья (мицелий и/или споры). Следует подробно описать метод культивирования и обосновать ключевые параметры культивирования (например, температуру), а также продемонстрировать отсутствие определяемого количества микотоксинов, производимых грибами. Необходимо предоставить данные о составе среды, используемой для культивирования, и компонентах среды. Предпочтительным является использование синтетических сред, т.е. сред, не содержащих материал животного происхождения или аллерген.

Не следует использовать штаммы, производящие микотоксины, такие как афлатоксины или охратоксины, за исключением случаев, когда их использование может быть должным образом обосновано, и тогда следует оценивать их мутагенный потенциал. В этом случае до начала обработки также следует определять количество релевантных микотоксинов и выполнять их удаление в процессе обработки при помощи валидированных методов. Следует предпринимать соответствующие меры для предотвращения контаминации другими штаммами грибов.

Клещи

Следует указать виды клещей, а также морфологию и другие параметры (например, биохимические или генетические свойства), применяемые для идентификации клещей.

Необходимо предоставить подробную информацию о методе культивирования и составе среды, используемой для культивирования, а также компонентах среды. Предпочтительным является использование синтетических сред, не содержащих материал животного происхождения или аллерген. Следует описать условия культивирования и время сбора материала, а также определить соответствующие ключевые параметры культивирования. Необходимо указать, какая часть культуры используется при дальнейшей обработке, например, только клещи, экскременты клещей или вся культура клещей или смеси культур.

Аллергены животных

Необходимо использовать только здоровых животных, для которых по возможности должны быть предоставлены сертификаты о состоянии их здоровья. Если используются умерщвленные животные, то используемые материалы должны быть собраны в течение нескольких часов после их смерти, при этом мертвых животных следует хранить в условиях, которые позволяют обеспечивать качество используемого материала. Необходимо описать морфологические и иные параметры, используемые для идентификации исходных материалов аллергенов.

Должен быть указан состав исходных материалов (например, волосы, шкура, эпителий, слюна или моча). Необходимо внимательно проверять материалы на предмет возможного загрязнения клещами и плесенью, и по возможности избегать подобных загрязнений. Ответственное лицо должно подтвердить, что используемые животные не были в последнее время обработаны противопаразитарными или другими лекарственными препаратами.

Сбор шерсти и перхоти должен быть выполнен без повреждения кожи животного. Методы, при которых происходит измельчение всей кожи и/или шкурок, не должны использоваться. Должны быть описаны условия хранения.

Яды перепончатокрылых насекомых

Необходимо указывать морфологические особенности животных и другие характеризующие параметры. Должен быть описан метод сбора яда перепончатокрылых насекомых. Необходимо подтверждение, что количество релевантных пестицидов сведено к минимуму. Таким подтверждением может являться сертификат, который подтверждает, что для изготовления культур аллергенов перепончатокрылых насекомых не использовались пестициды.

4.2.3.2. Контроль исходных материалов, используемых для изготовления рекомбинантных аллергенов

В отношении рекомбинантных аллергенов следует учитывать требования всех применимых действующих руководств.

4.2.3.3. Контроль сырья

Для каждого вида сырья необходимо предоставить спецификацию, сведения об источнике происхождения и обоснование его использования.

Если какие-либо аллергенные компоненты используются в культуральной среде, необходимо подробное описание процедуры их удаления в процессе производства.

4.2.4. Описание характеристик и контроль действующего вещества

4.2.4.1. Описание характеристик и контроль экстрактов аллергенов

Описание характеристик и контроль качества экстрактов аллергенов следует проводить в отношении действующего вещества. Если некоторые виды испытаний не могут быть применены к действующему веществу, например, к аллергоидам, предпочтение стоит отдавать проведению тестов на промежуточных стадиях, а не в отношении действующего вещества, если это обосновано. При таких условиях требования к качеству продукта должны быть определены непосредственно перед модифицированием или разведением, а критерии приемлемости следует рассматривать как критерии приемлемости в процессе производства, их следует включить в спецификации на готовый продукт для действующего вещества. Как правило, применяются следующие критерии приемлемости: внешний вид и описание, подлинность, чистота и примеси, и суммарная активность аллергенов и определение активности основного аллергена.

Аллергены, входящие в состав продукта, должны быть указаны изготовителем. Необходимо подтвердить, что процесс производства подходит для работы с аллергенами и способен подтвердить их наличие с использованием надлежащих методов, например, методик на основе антител или масс-спектрометрии. Содержание релевантных аллергенов должно по возможности определяться с использованием сертифицированных стандартных образцов или биологических стандартов. Методики количественного определения должны быть валидированы в международных программах стандартизации. Белковый профиль должен соответствовать внутрипроизводственному стандартному образцу (IHRP), по возможности следует верифицировать наличие соответствующих компонентов аллергена. Необходимо обосновать выбор соответствующих компонентов аллергена, подлежащих анализу. Если значительная часть суммарной аллергенной активности или проблемы безопасности зависят от других (например, представленных в меньшем количестве) аллергенов, то необходимо также провести их оценку.

Производитель должен подтвердить однородность характеристик продукции от серии к серии и предоставить обоснование выбранных и валидированных процедур анализа.

4.2.4.2. Описание характеристик и контроль рекомбинантных аллергенов

Особое внимание следует уделить структурной целостности и постоянству укладки, поскольку эти факторы могут повлиять на иммуногенные свойства и безопасность при специфической иммунотерапии (СИТ). В соответствующих случаях необходимо проводить изучение пост-трансляционных модификаций, например, гликозилирования. Неизмененная биологическая функция (например, физиологическая функция растительного фермента) аллергенного белка, полученного при помощи технологии рекомбинантной ДНК, может служить косвенным показателем структурной целостности, но не является основным показателем для определения аллергенности или иммуномодулирующей активности. Таким образом, подтверждение биологической функции не является необходимым для рекомбинантных аллергенов.

Особое внимание должно уделяться потенциальным примесям среды и клеток-хозяина. Необходимо идентифицировать и количественно определять данные примеси, а также определять их способность вызывать нежелательные побочные реакции и аллергические реакции.

Рекомбинантные аллергены следует идентифицировать и количественно оценивать с помощью соответствующих методов для рекомбинантных белков. Содержание должно быть по возможности выражено в весе на единицу объема. Соотношение между количеством отдельных рекомбинантных аллергенов и соответствующей биологической (например, аллергенной) активностью должно быть отражено в валидационных исследованиях. Для молекул рекомбинантных аллергенов при проведении количественного определения активности могут использоваться методы ELISA со специфическими антителами животного происхождения, в том случае, если доказана взаимосвязь между связыванием с IgE. Для рекомбинантных аллергенов со сниженной IgE-реактивностью определение активности желательно проводить в виде распознавательного теста для того, чтобы различать молекулы с высокой и низкой IgE-связывающей способностью, например, путем количественного определения в системах ELISA, а также количественного определения для верификации снижения реактивности IgE.

Для смесей различных рекомбинантных аллергенов должно определяться содержание отдельных аллергенов с помощью надлежащих методов количественного определения, например, ELISA непосредственно перед смешиванием и в смеси, если иное не обосновано. Следует, по возможности, учитывать общие правила, приведенные в разделе 4.1.2 (Смеси аллергенов).

4.2.4.3. Описание характеристик и контроль препаратов модифицированных аллергенов

Для модифицированных аллергенов (например, денатурированных или химически модифицированных аллергоидов или конъюгатов) должны быть утверждены количественные испытания на основе антител или другие надлежащие методы анализа, с целью определения релевантных аллергенов в модифицированной форме. Для определения ожидаемой модификации аллергенов, а также для описания характеристик модифицированных аллергенов и подтверждения стабильности процесса модификации должны использоваться другие анализы, например, при помощи метода пептидного картирования с масс-спектрометрией, гель-хроматографии или других методов можно определить степень полимеризации (например, наличие аминогрупп).

4.2.4.4. Оценка активности

Для различных видов активных веществ должны применяться следующие методы анализа активности:

• Для экстрактов аллергенов и очищенных аллергенов без структурных модификаций, суммарная аллергенная активность должна определяться сравнительным анализом связывания IgE. Если продукт определяется на основе релевантных аллергенов, необходимо подтвердить взаимосвязь с суммарной аллергенной активностью.

• Некоторые аллергены могут определяться иммунологическими методами (например, ELISA) со специфическими антителами животного происхождения.

• Для аллергоидов испытания активности должны включать дискриминативный тест или комбинацию иммунологических тестов для того, чтобы разделять неизмененные и модифицированные молекулы, например, методом количественного анализа в системе ELISA или количественного определения высвобождения медиаторов, а также количественный анализ для определения отсутствия IgE-реактивности. В качестве альтернативы дискриминативному иммуноанализу можно использовать другие методы подтверждения наличия релевантных аллергенов (например, масс-спектрометрию).

• Для конъюгатов при испытании активности необходимо учитывать иммуномодулирующие свойства конкретных модификаций.

Необходимо выявить наличие конкретных аллергенов и по возможности провести их количественный анализ, используя сертифицированные биологические стандарты и утвержденные методики испытаний.

Если значительная часть суммарной аллергенной активности или проблемы безопасности зависят от других (например, представленных в меньшем количестве) аллергенов, то необходимо также провести их оценку. Испытания активности рекомбинантных аллергенов описаны в разделе 4.2.4.2.

4.2.5. Стабильность

Если для действующего вещества предусмотрено хранение, необходимо провести исследования стабильности в соответствии с руководствами по испытанию стабильности (например, ICH Q1А) 15, с целью получения информации о максимально допустимом периоде хранения. Общие принципы, обозначенные в руководстве ICH Q5C 5 для биологических/биотехнологических продуктов, также должны учитываться при анализе экстрактов аллергенов.

Что касается гомологичных групп, необходим полный набор данных в отношении аллергена, являющегося «репрезентативным» для конкретной гомологичной группы. Для «нерепрезентативных» аллергенов, исследования стабильности могут проводиться постоянно на протяжении всего периода срока годности действующего вещества. Если эти данные недоступны на момент подачи заявления на регистрацию, заявитель должен предоставить обязательство о продолжении исследований стабильности после получения регистрационного удостоверения. Комплект документов для получения регистрационного удостоверения должен содержать подробный протокол исследований стабильности «нерепрезентативных» аллергенов. При должном обосновании разрешено экстраполировать некоторые данные по стабильности «репрезентативного» аллергена. Экстраполяция результатов от «репрезентативного» аллергена должна быть рассмотрена и обоснована с учетом данных, связанных с деятельностью тех энзимов (например, протеаз), которые могут влиять на структуру отдельных молекул.

4.3. СТАНДАРТНЫЕ ОБРАЗЦЫ И МАТЕРИАЛЫ

Для всех видов продуктов аллергенов должны быть разработаны и подробно описаны стандартные материалы.

Внутренние стандарты (IHRP) для экстрактов аллергенов:

Внутренние стандарты, изготовленные на самом предприятии, могут использоваться только в том случае, если отсутствуют официальные стандарты с известным и контролируемым составом основных аллергенов и известной суммарной аллергенной активностью.

Экстракты аллергенов, полученные от разных производителей, могут иметь отличия в связи с разнообразием исходных биологических материалов. Определенные различия возможны даже между сериями одного производителя. Данные характеристики представляют собой проблему для дальнейшей гармонизации продуктов, получаемых от разных производителей. Компания должна обеспечить, по меньшей мере, постоянство серий в рамках производственного цикла путем внедрения IHRP, которые должны использоваться в качестве внутренних стандартных образцов, а также используя различные биологические и аналитические процедуры. IHRP получают в процессе производства, как это определено в досье. Если принимаются дополнительные меры по повышению стабильности IHRP (например, лиофилизация или добавление стабилизатора), это должно быть обосновано заявителем. IHRP устанавливает контрольные значения, с которыми сравниваются экстракты всех будущих производственных циклов. Таким образом, качественный и количественный состав производимых серий должны соответствовать заданным критериям, определяемым в сравнении с IHRP. Эти критерии должны быть обоснованы.

Определение характеристик IHRP должно проводиться с использованием подходящих доступных методов, также необходимо установить специфическую аллергенную активность. Необходимо предоставить данные о белковом и, по возможности, углеводном составах. Необходимо учитывать релевантность гликопротеинов, связывающих IgE. Необходимо подтвердить наличие всех релевантных аллергенов в IHRP.

Для биохимического и структурного анализа следует применять нижеперечисленные методы: изоэлектрофокусирование, анализ распределения молекулярной массы методом электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН-ПААГ), капиллярный электрофорез, хроматографические методы, масс-спектрометрию или другие подходящие методы. Везде, где это возможно, необходимо определять конкретные аллергены с использованием специфических антител или других методов, при этом необходимо использовать принятую международную номенклатуру аллергенов.

Концентрация соответствующих отдельных аллергенов должна быть определена по возможности с использованием сертифицированных стандартных образцов или биологических стандартов и методик количественного определения, валидированных в соответствии с международными программами стандартизации.

Информация, касающаяся аллергенных свойств белков, содержащихся в IHRP, может быть получена в результате испытаний, включающих иммуноблоттинг со смешанной сывороткой. Сыворотка крови отдельных пациентов может быть использована для получения аллергограммы. Активность IHRP должна быть определена методом иммуноанализа (например, сравнительный анализ связывания IgЕ и определение высвобождения клеточных медиаторов) и выражена в единицах биологической активности. Кроме того, можно проанализировать способность пролиферации Т-клеток.

Необходимо провести биологическую стандартизацию IHRP с помощью соответствующих методов на основе теста реактивности кожи, используя методы испытаний, описанные в изданиях Turkeltaub 16 и Nordic Council of Medicines 17. В случае недостаточного количества пациентов для in vivo стандартизации, может применяться стандартизация IHRP in vitro. Стабильность IHRP и условия хранения должны быть задокументированы.

Если необходимо разработать новую серию IHRP для одного и того же аллергена, то в этом случае как старый, так и новый IHRP должны тестироваться параллельно, с целью исключения сдвига биологической активности. Данная стандартизация должна быть выполнена с использованием определенного набора методов in vitro, но также может включать in vivo анализ. Должно быть представлено подробное описание протокола. В целом результаты количественного анализа должны согласовываться с результатами предыдущей серии IHRP. В случае различий в результатах должен быть установлен коэффициент корреляции. Должен быть проведен анализ тенденций во избежание сдвигов параметров качества.

Внутренние стандарты (IHRP) для рекомбинантных белков:

Для IHRP, используемых для контроля качества рекомбинантных аллергенов, необходимо соблюдать требования, изложенные в руководстве ICH Q6B 7, а испытание активности должно проводиться в соответствии с разделом 4.2.4.2. Необходимо обосновать выбор стандартных материалов и стратегий испытаний.

Смесь сывороток:

Для смеси сывороток необходимо осуществлять контроль серий, а также отдельных IHRP. При изготовлении пула сывороток необходимо учитывать проблему различающихся в зависимости от географических признаков моделей сенсибилизации. Для используемых сывороток при приготовлении пула следует учитывать частоту распознавания IgE, присущую различным аллергенам, а также содержание аллерген-специфических IgE-антител и клиническую значимость сенсибилизации. Пул должен состоять из сывороток, полученных от 10-15 пациентов. В пул не следует включать сыворотки, распознающие углеводные эпитопы, а также сыворотки, полученные от пациентов, ранее проходивших специфическую иммунотерапию (СИТ) с определенным или кросс-реактивным аллергеном. Кроме того, сыворотки, содержащие IgE-антитела к бычьему сывороточному альбумину, молочным белкам или желатину, могут вызвать проблемы при проведении испытаний, поэтому следует избегать их использования в пуле, если не обосновано иное.

Необходимо установить спецификации для пула сывороток, включающие критерии для профиля реактивности пула. Перед использованием следует подтвердить надлежащее качество пула сывороток путем соответствующих контрольных испытаний. Они должны включать подтверждение того, что соответствующие аллергены распознаются пулами.

4.4. ГОТОВЫЙ ПРОДУКТ

4.4.1. Описание и состав готового продукта

Должно быть предоставлено подробное описание готового продукта. Если готовый продукт состоит из смеси действующих веществ, необходимо указывать полный список всех используемых активных веществ. В целом, адсорбция и добавление вспомогательных веществ рассматриваются как изменение состава, поэтому данные манипуляции должны быть описаны в процессе производства готовой продукции.

4.4.2. Производство

Процесс производства, включая все его стадии, должен быть подробно описан. Необходимо предоставить пошаговую диаграмму (технологическую схему), с указанием всех стадий процесса, включая соответствующие стадии контроля за ходом процесса. Если используются асептические условия, они также должны быть описаны и отмечены в технологической схеме. Любые установленные сроки проведения процесса должны быть обоснованы. Должно быть предоставлено описание, документация и данные валидации производственного процесса. При надлежащей аргументации возможно проведение сокращенной программы валидации в отношении нерепрезентативных аллергенных продуктов той же самой гомологичной группы, при условии, что производственный процесс идентичен процессу производства репрезентативного аллергенного продукта, и для него доступны полные данные по валидации. Для нерепрезентативных аллергенов в случае проведения сокращенной программы валидации должны быть определены и внедрены критические стадии и ключевые параметры.

Если далее проводятся этапы адсорбции или модификации, эти стадии производственного процесса должны быть подробно описаны и приведены в схеме технологического процесса. Необходимо объяснить цель этих этапов. Кроме того, необходимо провести испытания, которые могли бы продемонстрировать успешность этих мероприятий и однородность продукции.

Если в производственном процессе используются материалы, полученные из человеческой плазмы, или если эти материалы используются в качестве вспомогательных веществ/стабилизаторов в составе готовых препаратов аллергенов, качество и безопасность в отношении трансмиссивных агентов должны соответствовать требованиям действующего руководства по лекарственным препаратам, полученным из плазмы [18].

4.4.3. Контроль готового препарата

Для готового препарата должны быть установлены соответствующие спецификации. Если невозможно провести какое-либо контрольное испытание (например, испытание для оценки активности) для готового препарата, необходимо установить спецификации для промежуточных продуктов на самой последней стадии перед этапом модификации. В подобных случаях результаты испытаний должны отвечать критериям приемлемости, установленным в спецификации на готовый препарат. Необходимо документально оформить характеристики всех дозировок (разведений) готового препарата. Если соответствующее испытание невозможно провести ввиду методологических ограничений, это должно быть обосновано. Следует учитывать указания, которые приведены в предыдущих частях настоящего руководства и которые распространяются также на контроль готового препарата.

Контроль препаратов немодифицированных аллергенов

Для стандартизации и контроля серий готовых препаратов, содержащих немодифицированные аллергены, необходимо провести определение суммарной аллергенной активности с помощью испытания для оценки конкурентного связывания IgE. Следовательно, на маркировке должны быть указаны единицы активности. При наличии возможности, для количественного анализа отдельных аллергенов следует применять тест-системы, которые были валидированы в международных программах стандартизации. В этом случае содержание отдельных аллергенов, выраженное в единицах массы на объём, необходимо указать в спецификациях на готовый препарат, а также в краткой характеристике лекарственного препарата в дополнение к активности. Необходимо также определить содержание минорных аллергенов, если они связаны с рисками для безопасности.

Контроль смесей аллергенов

В случае смесей аллергенов испытание для оценки активности должно быть выполнено для каждой отдельной активной субстанции аллергена, входящей в состав смеси. Если невозможно провести испытание отдельных активных субстанций в готовом препарате из-за перекрестной реактивности компонентов, то суммарную активность готового препарата следует определить с помощью испытания для оценки конкурентного связывания IgE.

Контроль адсорбированных препаратов

В случае адсорбированных препаратов эффективность и стабильность адсорбции необходимо определить путём измерения количества общего растворимого белка и/или наличия в надосадочной жидкости компонентов, связывающихся с IgE, или с помощью других подходящих методов. Испытания должны проводиться, как минимум, два раза: при выпуске препарата и в конце срока годности. Эти параметры необходимо контролировать в ходе исследований стабильности, проводимых для адсорбированных препаратов.

Контроль рекомбинантных аллергенов

Готовые препараты, содержащие рекомбинантные аллергены, должны отвечать требованиям руководства ICH Q6B [7]. Содержание очищенного белка (например, основного аллергена) и активность определяют в соответствии с разделами 4.2.4.2 и 4.2.4.4.

Нестандартизованные экстракты аллергенов

Некоторые аллергены не могут быть полностью стандартизованы из-за отсутствия достаточного количества пациентов для проведения биологической стандартизации и для создания соответствующей смеси сывороток, что бывает, например, в случае редких аллергических заболеваний. В этом случае для контроля готового препарата можно применять ряд методов in vitro, например, определение антигенного профиля, белкового профиля и содержание общего белка и отдельных аллергенов. Если не проводят испытание ни по одному из перечисленных выше параметров, то это должно быть обосновано.

4.4.4. Система упаковки/укупорки

Необходимо подробно описать системы упаковки/укупорки, используемые для различных дозировок. Кроме того, должны быть описаны все другие составляющие готового лекарственного препарата, включая, например, растворители для разведения или шприцы.

4.4.5. Стабильность

Испытание стабильности следует проводить в режиме реального времени, как указано в соответствующих руководящих документах [5, 15], с помощью анализов для определения стабильности. Испытание на стерильность необходимо провести для всех парентеральных препаратов, офтальмологических препаратов, препаратов для ингаляций или препаратов для кожных скарификационных проб. В случае использования консервантов, например, в контейнерах многоразового использования, необходимо оценить эффективность противомикробной защиты в соответствии с действующей монографией Европейской Фармакопеи (Ph. Eur.) (5.1.3 «Эффективность противомикробной защиты»). Нестерильные лекарственные препараты (например, для перорального приёма) должны отвечать требованиям монографии Ph. Eur., 5.1.4. («Микробиологическое качество фармацевтических препаратов»). В случае экстрактов аллергенов, принадлежащих к одной и той же гомологичной группе, необходимо предоставить полный набор данных по стабильности для репрезентативного аллергена. Некоторые данные по стабильности для репрезентативного аллергена могут быть экстраполированы на нерепрезентативные аллергены. Поэтому в этих исследованиях можно провести испытания только по ограниченному числу параметров. Заявитель должен обосновать выбор этих параметров. Необходимо проанализировать и обосновать экстраполяцию результатов, полученных для репрезентативного аллергена. Экстраполяцию не всегда можно выполнить для всех препаратов аллергенов, например, следует рассматривать различия ферментной активности репрезентативного и нерепрезентативного аллергенов, если она значима для стабильности препарата. Данные для нерепрезентативных аллергенов можно получить в продолжающихся исследованиях стабильности в режиме реального времени уже после выдачи регистрационного удостоверения. Если данные не доступны на момент подачи заявки на получение регистрационного удостоверения, заявитель должен гарантировать, что исследования стабильности будут продолжены после утверждения заявки. В заявке на получение регистрационного удостоверения должен быть предоставлен подробный протокол исследований стабильности нерепрезентативных аллергенов.

Если готовый препарат состоит из смеси экстрактов аллергенов, не принадлежащих к одной и той же гомологичной группе, необходимо провести исследования стабильности этой смеси с учётом каждой отдельной активной субстанции. Если отдельные экстракты в смеси принадлежат к одной и той же гомологичной группе и вследствие этого между соответствующими аллергенами происходит перекрёстная реактивность, то определение активности отдельных активных субстанций может быть невозможным. В подобных случаях (например, смесь экстрактов пыльцы трав) может проводиться определение суммарной активности, выполняемое с помощью испытания для оценки конкурентного связывания IgE. Заявитель должен подробно описать и обосновать стратегию выбранного испытания.

Для экстрактов аллергенов необходимо рассмотреть возможность исследования стабильности препаратов, произведённых из активной субстанции с истекающим сроком годности. Если такое исследование проводится, оно должно быть начато в ходе разработки, либо должны быть предоставлены гарантии того, что подобное исследование будет проводиться после получения регистрационного удостоверения.

Для адсорбированных препаратов необходимо подтвердить стабильность адсорбции и/или модификации в конце срока годности путём измерения количества общего растворимого белка и/или определения наличия в надосадочной жидкости компонентов, связывающихся с IgE, или с помощью других подходящих методов. Для того чтобы подтвердить стабильность препаратов, содержащих природные и модифицированные аллергены, в качестве испытаний для оценки активности можно рассмотреть анализы хода высвобождения медиаторов (например с помощью мышиного IgE и крысиных базофильных лейкемических клеток).

Если невозможно провести испытания для оценки активности, например, в случае адсорбированных материалов, необходимо проводить испытания на иммуногенность in vivo или валидированные альтернативные испытания in vitro в исследованиях стабильности в начале и в конце предлагаемого срока годности. Исследование стабильности должно быть начато в ходе разработки, чтобы можно было получить доказательство стабильности готового препарата.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Аллерген (allergen) – молекула, способная вызывать индукцию IgE-опосредованного иммунного ответа и/или аллергическую реакцию I типа.

Рекомбинантные аллергены (Recombinant allergens) – белки, полученные с помощью технологии рекомбинантных ДНК. В кодирующей последовательности может быть зашифрована полная аминокислотная последовательность отдельных аллергенов или только её часть. Рекомбинантные аллергены могут обладать аллергенной активностью, сравнимой с аллергенной активностью природных аллергенов, но препарат может также обладать низкой IgE-связывающей способностью, которая обусловлена отбором природных гипоаллергенных вариантов или вызвана изменениями последовательности или физико-химическими модификациями.

Экстракты аллергенов (allergen extracts) – экстракты из природных биологических исходных материалов, содержащих смесь аллергенных и неаллергенных молекул.

Препараты аллергенов (allergen products) – лекарственные препараты, содержащие аллергены или производные аллергенов, предназначенные для диагностики in vivo или лечения аллергических заболеваний.

Основные/минорные аллергены (major/minor allergens) – аллергены, которые вызывают образование аллерген-специфических антител IgE не менее чем у 50 % (основные аллергены) или менее чем у 50 % (минорные аллергены) испытуемых пациентов.

Релевантные аллергены (relevant allergens) – аллергены, вызывающие клинически значимый эффект у значительной части пациентов с аллергией.

Аллергоиды (allergoids) – аллергены, которые были подвергнуты химической модификации с целью снижения IgE-реактивности.

Конъюгаты (conjugates) – аллергены, которые ковалентно связаны с другими молекулами для модуляции их иммунологических свойств.

Гомологичные группы (homologous groups): экстракты аллергенов, полученные из разных видов, родов или семейств, и готовые препараты, полученные из этих экстрактов аллергенов, могут быть объединены в гомологичные группы на основании состава и физико-химических, а также биологических свойств исходного материала, перекрёстной реактивности/структурной гомологии аллергенов, состава готового препарата и процесса производства экстракта аллергена и готового препарата.

Суммарная аллергенная активность (total allergenic activity) – способность к связыванию со специфическими антителами у пациентов с аллергией, измеряемая с помощью испытания для оценки конкурентного связывания IgE.

Испытание для оценки конкурентного связывания IgE (competitive IgE-binding test) используется для определения суммарной аллергенной активности. К используемым анализам относятся, например, анализы ингибирования IgE, в которых оценивают способность образца аллергена (серия разведений) в жидкой фазе ингибировать связывание человеческого IgE со стандартными аллергенами в твёрдой фазе, а также анализы, в которых постоянное количество меченых аллергенов и образец аллергена (серия разведений) конкурируют за специфическое связывание с антителами IgE, иммобилизованными на твёрдой фазе.

Активность (potency): в соответствии с руководством Q6B ICH, активность определяется как «количественная мера биологической активности, которая основана на показателе препарата, связанном со значимыми биологическими свойствами»; активность оценивается с помощью соответствующего количественного биологического анализа (также называемого анализом для оценки активности или биоанализом). Для немодифицированных аллергенов или экстрактов аллергенов в качестве показателя активности может служить суммарная аллергенная активность.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ (научные и/или нормативные источники)

(1) Guideline on the Clinical Development of Products for Specific Immunotherapy for the Treatment of Allergic Diseases (CHMP/EWP/18504/2006)

(2) Note for Guidance on Biotechnological/Biological Products Subject to Changes in their Manufacturing Process (ICH Q5E; CPMP/ICH/5721/03);

(3) Guideline on Comparability of Medicinal Products containing Biotechnology-derived Proteins as Active Substance -Quality Issue (EMEA/CPWP/BWP/3207/00/Rev1)

(4) Note for Guidance on Quality of Biotechnological Products: Analysis of the Expression Construct in Cell Lines Used for Production of r-DNA Derived Protein Products (ICH Q5B; CPMP/ICH/139/95)

(5) Quality of Biotechnological Products: Stability Testing of Biotechnological/Biological Products (ICH Q5C; CPMP/ICH/138/95)

(6) Derivation and Characterisation of Cell Substrates Used for Production of Biotechnological/Biological Products (ICH Q5D; CPMP/ICH/294/95)

(7) Specifications: Test Procedures and Acceptance Criteria for Biotechnological/Biological Products (ICH Q6B; CPMP/ICH/365/96)

(8) Note for Guidance on Quality of Biotechnological Products: Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products derived from Cell Lines of Human or Animal Origin (ICH Q5A; CPMP/ICH295/95)

(9) Note for Guidance on Virus Validation Studies: The Design, Contribution and Interpretation of Studies validating the Inactivation and Removal of Viruses (CPMP/BWP/268/95)

(10) Note for Guidance on Minimising the Risk of Transmitting Animal Spongioform Encephalopathy Agents via Human and Veterinary Medicinal Products (EMEA/410/01)

(11) Guideline on Good Agricultural and Collection Practice (GACP) for Starting Materials of Herbal Origin (EMEA/HMPC/246816/2005)

(12) Guideline on Specifications: Test Procedures and Acceptance Criteria for Herbal Substances, Herbal Preparations and Herbal Medicinal Products/Traditional Herbal Medicinal Products (CPMP/QWP/2820/00 Rev 1)

(13) Guideline on Quality of Herbal Medicinal Products/Traditional Herbal Medicinal Products (CPMP/QWP/2819/00 Rev 1)

(14) Ph. Eur. monograph on Allergen Products (1063)

(15) Note for Guidance on Stability Testing: Stability Testing of New Drug Substances and Products (ICH Q1A (rev. 2); CPMP/ICH/2736/99)

(16) Turkeltaub PC. Biological Standardization of allergen extracts. Allergol. Immunopathol., 1989; 17; 53-65

(17) Nordic Council of Medicines. Registration of Allergenic Preparations. Nordic Guidelines, Vol. 23, 2nd edition. Uppsala, Sweden: NLN Publications 1988. pp 1-34

(18) Note for Guidance on Plasma-Derived Medicinal Products (CPMP/BWP/269/95)

(19) A.R. Lorenz, D. Lüttkopf, S. May, S. Scheurer, S. Vieths. The Principle of Homologous Groups in Regulatory Affairs of Allergen Products – A Proposal. Int Arch Allergy Immunol 2008 Aug 12;148(1):1-17.

ПРИЛОЖЕНИЕ 1

Один член гомологичной группы выбирается в качестве вида-представителя. Выбор должен быть обоснован с учётом, например, географических различий моделей сенсибилизации и других значимых факторов.

Предлагаемые гомологичные группы (Lorenz [19])

1. Пыльца деревьев

«Группа берёзы» или «группа букоцветных»

Betula verrucosa = B. pendula* = B. alba – берёза повислая

Alnus glutinosa – ольха

Carpinus betulus – граб

Corylus avellana – лещина обыкновенная

Quercus alba – дуб

Castanea satavia

Fagus sylvatica

* Корректное таксономическое название в соответствии с таксономической базой данных Национального центра биотехнологической информации США (NCBI)

Группа Oleaceae

Olea europaea – олива

Fraxinus excelsior – ясень

Ligustrum vulgare – бирючина

Syringa vulgaris – сирень

Группа Cupressaceae

Виды рода Juniperus (кедр)

Виды рода Cupressus (кипарис)

Виды, не входящие в какие-либо группы. Требуется обоснование.

Fagus sylvatica – бук европейский

Виды рода Acer (клён)

Виды рода Platanus (платан)

Виды рода Populus (тополь)

Robinia pseudoacacia – робиния ложноакациевая, рожковое дерево

Виды рода Salix (ракита/ива)

Виды рода Tilia (липа)

Виды рода Ulmus (вяз)

Cryptomeria japonica – криптомерия японская

2. Пыльца трав и злаков

Группа зубровки душистой семейства Poaceae (Gramineae), подсемейства Pooideae

Anthoxanthum odoratum – душистый колосок

Avena sativa – овёс

Dactylis glomerata – ежа сборная

Виды рода Festuca (овсяница луговая)

Holcus lanatus – бухарник шерстистый

Hordeum vulgare – ячмень

Lolium perenne – райграс пастбищный

Phleum pratense – тимофеевка луговая

Poa pratensis – мятлик луговой

Secale cereale – посевная рожь

Triticum aestivum – посевная пшеница

Дополнительные виды трав, входящие в гомологичную группу Pooideae, с возможностью внесения изменений и дополнений

Виды рода Agropyron (пырей ползучий, пырей гребенчатый)

Виды рода Agrostis (полевица)

Alopecurus pratensis – лисохвост луговой

Arrhenatherum elatius – райграс высокий

Виды рода Bromus (костёр)

Виды, не входящие в какие-либо группы. Требуется обоснование.

Cynodon dactylon – свинорой пальчатый

Cynosurus cristatus – гребенник обыкновенный

3. Пыльца сорных трав

Группа видов сорных трав

Ambrosia artemisiifolia, Ambrosia trifida – амброзия полыннолистная

Artemisia vulgaris – полынь обыкновенная

Parietaria judaica, Parietaria officinalis – постенница лекарственная

Виды, не входящие в какие-либо группы. Требуется обоснование.

Виды рода Plantago (подорожник)

4. Клещи

Группа клещей домашней пыли рода Dermatophagoides

Dermatophagoides pteronyssinus

Dermatophagoides farinae

Виды клещей, не входящие в какие-либо группы. Требуется обоснование.

Acarus siro – мучной клещ

Glycyphagus domesticus – клещ домовой

Lepidoglyphus destructor – клещ домовой

Thyreophagus entomophagus – клещ мучной

Tyrophagus putrescentiae – амбарный клещ

5. Яды насекомых

Гомологичных групп нет. Требуется обоснование.

6. Экстракты аллергенов, полученные из позвоночных

Экстракты из эпителия, шерсти, перхоти животных и т.п.

Гомологичных групп нет. Виды, не входящие в какие-либо группы. Требуется обоснование.

Canis familiaris – собака

Felis domesticus – кот

Cavia porcellus – морская свинка

Cricetus cricetus – хомяк

Equus caballus – лошадь

Mus musculus – мышь

Oryctolagus cuniculus – кролик

Виды рода Rattus (крыса)

7. Плесневые грибы

Гомологичных групп нет. Требуется обоснование. При обосновании объединения плесневых грибов в группы необходимо обратить особое внимание на схожую стабильность.