Методы определения содержания механических включений в инъекционных лекарственных формах и офтальмологических растворах

Подробнее
Текстовая версия:

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ МЕХАНИЧЕСКИХ ВКЛЮЧЕНИЙ В ИНЪЕКЦИОННЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ И ОФТАЛЬМОЛОГИЧЕСКИХ РАСТВОРАХ

ВВЕДЕНИЕ

Общие главы USP Инъекционные лекарственные формы и имплантируемые лекарственные средства <1>  и Механические включения в инъекционных лекарственных формах <788> направлены на отбор и разработку (или оптимизацию) систем, способов упаковки и технологию изготовления лекарственного препарата в отношении чистоты и стабильности торгового препарата. Технологические потоки, оборудование, линии наполнения, помпы, резервуары для хранения, униформа и деятельность персонала, состояние окружающей среды – всё это может способствовать попаданию механических включений в расфасованный препарат. Недостаточная очистка компонентов продукта и несоответствующий выбор как упаковочных систем, так и компонентов состава лекарственного средства, могут способствовать мгновенному и даже продолжительному образованию частиц. Все эти факторы механических включений и качества готового препарата могут быть определены на основании методов, представленных в главе <788> , или их вариантами. Требования главы <788> распространяются на все препараты для парентерального введения, если только они специально не исключены самой главой <788> или монографией. В отношении дозировочных форм, где требования главы <788> не могут непосредственно применяться, рассматриваются альтернативные методы и/или оценка технологических потоков, наполнителей или компонентов. Например, стерильные суспензии с известными частицами действующего вещества невозможно отличить от частиц препарата, даже при методе светоблокировки для обнаружения посторонних веществ. Для взвешенных частиц, превышающих номинальную пористость мембран <788>, на мембранный микроскопический анализ значительное воздействие окажут твердые частицы. Только непосредственная оценка (определяемая в главе <788>) отмывочных жидкостей контейнера/укупорки и наполнителя препарата возможна для данных суспендирующих систем. Можно рассмотреть дополнительные методы, такие как:

Должная осмотрительность при использовании методов главы <788>, ее вариаций, и принципов альтернативных методов в отношении изучения лучшего дизайна продукта, возникает во время разработки, и может быть продолжена в отдельных оценках в течение промышленного производства. Методика определения механических включений в инъекционных лекарственных формах приводится в USP <788>, гармонизированной с ЕФ и ЯФ. Разделы по калибровке приборов для светоблокировки и некоторые другие данные были исключены из главы по гармонизации. Глава <789> Механические включения в офтальмологических растворах не была гармонизирована. Глава <1788> включает важную информацию о стандартизации и калибровке измерительных приборов, применимую к <788> и <789>; а так же содержит рекомендации для обработки образцов, лабораторных условий, обучения операторов, и общие рекомендации, применимые к микроскопическому методу. Глава <1> требует, чтобы инъекционные лекарственные формы преимущественно не содержали видимых механических включений. Понятие «преимущественно не содержали» трудно определить, так как, среди прочих факторов, возможность обнаружения частиц зависит от их размера и количества. Абсолютный предел видимости или распознаваемости выражен не столь четко и зависит от условий проведения испытания и природы механических включений. Нижний предел диапазона видимости, безусловно, пересекает невидимые возможности обнаружения в <788> и <789>. В соответствующей литературе сообщается о степени видимости размеров 50 мкм, 100 мкм и 150 мкм (см. Список литературы 1 и 2), тогда как мембранный анализ может определить размер частиц до 1000 мкм и более. В главе <788> указывается предельное содержание невидимых механических включений в инъекционных лекарственных формах в двух пороговых значениях размера. Аналогичным образом <789> устанавливает ожидаемое содержание частиц в офтальмологических растворах в двух (светоблокировка) или трех (мембранное микроскопирование, ММ) пороговых значениях размера. Испытания, описанные в <788> и <789>, являются испытаниями физических пределов, проводимые с целью вычисления невидимых частиц (механических включений) в определенных диапазонах размеров (см. Рисунок 1).

Рисунок 1. Возрастающая вероятность визуального обнаружения

В главе <788> говорится: «Механические включения это посторонние подвижные нерастворимые частицы (кроме пузырьков газа), случайно присутствующие в растворах препаратов». Используя методы испытаний главы <788>, любые полутвердые и твердые вещества (и даже несмешивающиеся жидкости), которые приводят показания детектора светоблокировки выше выбранной пороговой величины размера, будут подсчитаны. Существуют две основные категории источников механических включений: внешняя и внутренняя. Методы светоблокировки и мембранного микроскопирования (ММ) обнаруживают частицы обеих категорий. Внешний материал является аддитивным, посторонним, и неменяющимся, и не представляется частью технологии изготовления лекарственного препарата, упаковки или процесса сбора. Примерами внешнего материала являются волокна, целлюлозный и растительный материалы, продукты процесса коррозии, красочные покрытия, и такие строительные материалы, как гипсобетон, бетон, металл и пластмасса. Внешние частицы являются аддитивными и обычно остаются неизменными на протяжении всего срока использования продукта, не считая случаев фрагментации, набухания (гидратации), или разрушения. Фрагменты резины, пластмассы, металла и стекла являются примерами внешних механических включений, осажденных в продукте во время сборки, или не удаленных во время процесса подготовки упаковки. Однако, если эти внешние частицы, как правило, исходят из определенной упаковки и/или процесса более последовательно и систематично, то их присутствие может считаться разновидностью внутренних частиц с аналогичным уровнем воздействия. Имманентный (внутренний) материал связан с упаковкой, компонентами технологии изготовления, технологическим процессом или процессом сборки. Имманентным материалом может быть так же постороннее вещество, занесенное упаковкой или технологическим процессом или недостаточно удаленное. Имманентный материал может меняться в результате ухудшения свойств в связи с изменением концентрации, разрушением, или ускорением реакции. Источники имманентных материалов являются неотъемлемой частью технологии изготовления и состава продукта, упаковки, и промышленных этапов сборки. Они представляют собой следующее разнообразие явлений, приводящих к нежелательным веществам:

Сочетание всех вышеперечисленных и физических явлений, таких как агрегация, оседание, коалесценция при наличии кристаллической решетки (масла, полутвёрдые лекарственные формы) может привести к появлению мелких частиц (<10мкм) в зоне обнаружения проведения испытания (10мкм). Поддающиеся обнаружению механические включения имманентного происхождения имеют весьма важное значение, поскольку частицы не очень заметно проявляются со временем, даже спустя значительное время после выпуска партии. Классификация имманентных материалов должна быть отличной от свойственных лекарственной форме характеристик. Такие свойства раствора, как небольшая мутность или слабое окрашивание сильно концентрированных составов, и белковые препараты, являются типичными примерами природных свойств жидкого препарата, и, хотя это может вызывать трудности в исследовании или при испытании на принципе светоблокировки, они не связаны с частицами. Некоторые составы растворов не могут быть проанализированы методом светоблокировки. Данный метод имеет трудности с продуктами, не имеющими прозрачности и чья вязкость приблизительно соответствует вязкости воды. Кроме того, такие характеристики состава, как цвет, высокая вязкость, или его природные свойства (изменения при сдвиге) могут спровоцировать ошибочные данные светоблокировки. Таким же образом продукты, вырабатывающие воздушные или газовые пузырьки (составы, содержащие бикарбонатный буфер), при попадании в измерительный элемент светоблокировки могут создавать ошибочные данные. Для таких образцов может потребоваться применение метода мембранного микроскопирования. Лабораторно-инструментальное подтверждение того, что метод светоблокировки не способен исследовать тестируемый препарат или выдает недействительные результаты, может помочь программа, регламентирующая регистрацию ЛС. Предполагается, что большинство тестируемых препаратов будет отвечать требованиям лишь на основе испытания светоблокировки; однако в целях окончательного заключения может потребоваться проведение анализа некоторых тестируемых препаратов методом светоблокировки вслед за методом ММ. По причине ограниченного количества образца, высокой себестоимости продукции, небольшого объема емкости или особых условий поставки растворов, может появиться желание протестировать меньшие объемы некоторых препаратов. Примерами могут служить биопрепараты, парентеральные и офтальмологические препараты мелкосерийного производства, и препараты в инновационной упаковке, предназначенные для специальных медицинских целей. Ожидается соблюдение ограниченного применения данных препаратов; однако возможно использование утвержденных производителем методов в целях подтверждения соблюдения условий испытания. При светоблокировке могут потребоваться специальные малообъёмные трубки для подачи образца и объединения многочисленных упаковок. Рассмотрим пример: препарат малого объема (100 мл), расфасованный в предварительно наполненный стерильный шприц. Свойства упаковки обеспечивают простую доставку продукта растворения и могут быть использованы для прямого отбора образцов, но объем в 100 мл исключает объединение больших объемов (~ 25 мл) для метода светоблокировки. Прямой отбор образцов с укупорочного материала для микроскопического измерения и анализ концентрации частиц отдельной или объединенной упаковки могут быть оптимальным способом сбора данных. Так же в данном примере для подтверждения приемлемости продукта потребуется тщательная статистическая оценка выборки партии с использованием образцов малых объемов (но не доз).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧАСТИЦ МЕТОДОМ СВЕТОБЛОКИРОВКИ

Прибор для испытаний

Прибор представляет собой систему подсчета частиц взвеси, которая использует сенсорный датчик светоблокировки с соответствующим устройством подачи образца для доставки аликвоты. Взвешенные частицы в пробной жидкости, протекающие между источником света и сенсорным датчиком, создают изменения в сигнале, которые коррелируют с размером частиц. В силу характера метода обнаружения и системы подсчета, воздушные пузырьки и несмешивающиеся жидкости могут препятствовать достаточному количеству света для возможности их регистрации вместе с определяемыми взвешенными частицами. Подобные затруднения должны быть уменьшены за счет надлежащих методик приготовления. Растворы с избыточными несмешивающимися жидкостями могут не поддаваться анализу светоблокировки. Целый ряд соответствующих устройств такого типа имеется в широкой продаже. Проводящий испытание несет ответственность за то, чтобы рабочие параметры контрольно-измерительных приборов соответствовали требуемой правильности и прецизионности результатов испытаний, устранялись или учитывались помехи, присущие некоторым продуктам. Одним из примеров является белковый препарат, который может образовывать индуцированные сдвигом полутвердые частицы вследствие перемешивания и подсчета «частиц». Необходимо обеспечить достаточную подготовку лиц, ответственных за техническое исполнение испытания. Следует отметить, что основная цель в данном случае заключается в том, чтобы счетчик частиц воспроизводил размер и количество частиц, присутствующих в исследуемом веществе. Применяемые средства измерения варьируются от систем, где калибровка и другие составляющие стандартизации могут осуществляться как неавтоматизированными процедурами, так и высокотехнологичными системами, включающими аппаратно-программное обеспечение для процедур стандартизации. Таким образом, невозможно точно установить конкретные методы, подлежащие соблюдению при стандартизации приборов, и необходимо подчеркнуть требуемый конечный результат процедуры стандартизации, а не конкретный метод достижения результата. Данный раздел призван подчеркнуть критерии, которые должны выполняться системой, а не конкретные методы, используемые в их определении. Пользователь несет ответственность за применение различных методов стандартизации, касающихся конкретного оборудования. Ключевые эксплуатационные критерии включают в себя следующее.

Предельные значения концентрации измерительной аппаратуры

Используемое оборудование должно иметь указанный производителем предел концентрации (максимальное количество частиц на мл), превышающий концентрацию частиц в испытуемом образце. Утвержденный изготовителем предел концентрации определяется как уровень значения, при котором количество совпадений из-за одновременного присутствия двух или более частиц в отображаемом объеме измерительного прибора составляет менее 10  % от количества полученных частиц размером 10 мкм.

Динамический диапазон

Динамический диапазон используемого измерительного прибора (диапазон величин частиц, поддающихся точному установлению размера и подсчету) должен включать наименьший размер частиц в препаратах, подлежащих учету.

Калибровочные испытания

В ходе последующего обсуждения калибровки и поверки приборов особое внимание уделяется рабочим характеристикам, а не конкретным калибровочным методам данной контрольно-измерительной аппаратуры. Такой подход наглядно проявляется в описании калибровки измерительных приборов, где необходимо учитывать немеханизированные методы, а так же те, которые основаны на программно-аппаратном обеспечении или использовании автоматизированных контрольно-измерительных приборов. Соответствующая аттестация измерительного оборудования имеет важное значение для выполнения испытания в соответствии с техническими требованиями. Так как в испытании может использоваться оборудование разных производителей, пользователь несет ответственность за, чтобы используемое счетное устройство функционировало в соответствии с инструкцией производителя; принципы, которых следует придерживаться для обеспечения функционирования оборудования в пределах допустимых диапазонах, определены ниже. Нижеследующая информация помогает обеспечить соблюдение точности объема образца, скорости потока, кривой зависимости величин частиц, разрешающей способности прибора измерения и точности подсчета, учитывающихся при осуществлении испытания. Такие процедуры проводятся не реже одного раза в шесть месяцев.

Точность объема образца

Так как количество частиц аликвоты напрямую зависит от объема отобранного раствора, необходимо, чтобы точность отбора образцов считалась в пределах определенного диапазона. Для определения объема образца измеряется мертвый объем (тары) в подающем образец устройстве с не содержащей частиц водой1. Объем не содержащей частиц воды, который больше, чем объем образца, переносят в резервуар и взвешивают. Используя подающее образец устройство, извлекается объем, необходимый для специального пробоотборника, и снова взвешивается резервуар. Объем образца определяется путем вычета объема тары из общего объема образца и тары. Необходимо удостовериться, что полученный объем находится в пределах 5% от соответствующего объема образца для испытания. Так же объем образца может быть определен с использованием надлежащего измерительного цилиндра класса A (см. Титровальный аппарат <31>). [ПРИМЕЧАНИЕ. Оборудованию такого типа необходима тара переменного объема. Это количество образца, извлеченное перед проведением подсчета. Для пробоотборников шприцевого типа объем можно определить, установив объем образца на ноль и приступить к отбору проб так, чтобы единственным объемом взятого раствора была тара. Для определения объема проб вычитается объем тары из общего объема взятого раствора из цикла отбора проб].

Скорость потока

Необходимо удостовериться, что скорость потока находится в пределах спецификации производителя для используемого измерительного прибора. Этого можно добиться с помощью калиброванного хронометра для измерения времени, необходимого прибору для извлечения и определения количества соответствующего объема образца (т.е. времени между началом и завершением цикла, обозначенным световыми индикаторами прибора или другими указателями). Измерительные приборы могут работать с высокой степенью точности в диапазоне скоростей потока. Дальше выполняется методика проведения испытания с той же скоростью потока, что и для калибровки измерительных приборов.

Калибровка

USP <788> определяет применение дисперсии сферических частиц известных размеров от 10 мкм до 25 мкм в воде, не содержащей частиц. Более детальное описание: Неавтоматизированный (ручной метод): оборудование калибруется с помощью как минимум трех калибровочных инструментов, таких как однородные по размеру полистироловые сферы с диаметром около 10, 15 и 25 мкм в водном растворителе, не содержащем частиц. Калибровочные сферы должны иметь средний диаметр в пределах 5 % от номинального диаметра и быть стандартизированы на соответствие веществ, согласно стандартным образцам Национального института стандартов и технологии США2. Общее количество известных сфер должно находиться в пределах концентрации измерительного прибора. Калибровочную смесь со сферическими частицами готовят в воде с концентрацией 1000-5000 частиц/мл, и определяют параметры настройки канала, которые соответствуют установке наибольшего значения для распределения сферических частиц по размерам. Это определяется с помощью установки порога наибольшего значения для разделения распределения в два приемника, содержащих равное количество частиц с измерительным прибором, установленным в дифференцированном режиме счета (метод калибровки путем полуколичественного подсчета при изменяемом поле зрения). При таких расчетах используется лишь средняя часть распределения во избежание включения ассиметричных участков пика. Равномерно разделенная часть распределения представляет собой окно расчета. Окно ограничено пороговыми значениями, позволяющими определить пороговое значение напряжения окна ± 20% вокруг среднего диаметра поверочных сфер. Окно предусматривает включение всех единичных сфер с учетом стандартного отклонения сфер и разрешающей способности прибора измерения, при этом исключая шум и агрегаты (скопления) сфер. Значение 20% было выбрано на основе наихудшего разрешения прибора в 10% и наихудшего стандартного отклонения сфер в 10%. Так как пороговые значения пропорциональны площади поперечного сечения сфер (и всех частиц), а не диаметра, то нижнее и верхнее значение напряжения определяется по формуле:

VL = 0.64VS

где VL – нижнее пороговое значение; VS – напряжение в центре пика, и

VU = 1.44VS

где VU – верхнее пороговое значение.

После установления пороговых значений центрального пика, они используются для создания логарифмической регрессии напряжения в сравнении с логарифмом размера частиц, после чего можно определить параметры настройки измерительного прибора для размеров от 10 до 25 мкм. Автоматизированный метод: калибровочная кривая может быть определена с использованием утвержденных программных процедур, предлагаемых производителями измерительных приборов; они могут быть включены в программное обеспечение оборудования или использоваться вместе с микрокомпьютером, соединенным со счетным устройством. Применение данных автоматизированных методов будет целесообразным, если производитель предоставляет письменное подтверждение того, что программное обеспечение определяет кривую отклика, эквивалентную той, что получена ручным методом, и если автоматизированная калибровка подвергается проверке по мере необходимости пользователя. Электронный метод: используя мультиканальный анализатор амплитуды импульсов, определяется центральный канал реакции на импульс счетчика частиц для каждого стандартного образца суспензии. Это значение пикового напряжения становится пороговым значением, используемым для расчета напряжения кривой отклика прибора. Определяется среднее значение напряжения каждого стандартного образца суспензии, используемого для калибровки. Затем данные пороговые значения используются для получения кривой отклика частиц по размерам ручным способом или с помощью программного обеспечения. Пороговые значения, установленные на основе данных мультиканального анализатора, затем направляются в вычислительное устройство для завершения калибровки.

Разрешающая способность измерительного прибора

Разрешающая способность в отношении размеров частиц зависит от используемого вычислительного прибора и может меняться в зависимости от каждого прибора одной модели. Разрешающая способность счетчика частиц для частиц размером 10 мкм определяется с помощью калибровочных сфер по 10 мкм. Относительное стандартное отклонение распределения частиц по размерам составляет не более 5 %. Приемлемыми методами определения разрешающей способности прибора в отношении размеров частиц являются: (1) неавтоматизированное определение величины размывания пика, обусловленное характеристикой прибора; (2) использование электронного метода измерения и разделения частиц выходного напряжения прибора с мультиканальным анализатором; и (3) автоматизированные методы. Неавтоматизированный (ручной метод): для работы в режиме суммарного или общего счета регулируется счётчик частиц. Для определения порогового значения напряжения 10-микрометровых сфер необходимо обратиться к ранее полученной калибровочной кривой. 3 канала счетчика, используемые в процедуре калибровки, регулируются следующим образом: Канал 1 установлен на 90 % порогового значения напряжения. Канал 2 установлен на пороговое значение напряжения. Канал 3 установлен на 110 % порогового значения напряжения. Выборка осуществляется через измерительный прибор с соблюдением значений счетчика в Канале 2. Когда количество частиц в этом канале достигнет приблизительно 1000, подсчет останавливается, и наблюдаются частицы в Каналах 1 и 3. Следует убедиться, что значения счетчика Канала 1 и Канала 3 составляют 1,68 ± 10 % и 0,32 ± 10 %, соответственно, от значений Канала 2, в противном случае необходимо настроить пороговые значения Каналов 1 и 3 для соответствия этим критериям. Когда критерии соблюдены, производится выборка суспензии через счетчик до тех пор, пока значения счетчика в Канале 2 не достигнут приблизительно 10,000 или пока не будет подсчитан соответствующий объем (например, 10 мл) суспензии из сферических частиц. Следует убедиться, что значения счетчика Канала 1 и Канала 3 составляют 1,68 ± 3 % и 0,32 ± 3 %, соответственно, от значений Канала 2. Регистрируются результаты размеров частиц для пороговых значений, только что определенных для Каналов 1, 2, 3. Размер частиц Канала 2 вычитается из размера частиц Канала 3. Размер частиц Канала 1 вычитается из размера частиц Канала 2. Определенные таким образом значения являются наблюдаемыми стандартными отклонениями среднего значения счетчика плюсовой и минусовой клемм для 10-микрометрового образца. Один из распространенных способов исчисления процентного значения разрешающей способности измерительного прибора выглядит следующим образом:

% разрешающая способность = (100/D) × [(SObs)2 − (SStd)2]1/2

SObs наиболее высокое наблюдаемое стандартное отклонение, установленное для образца сферы; SStd – стандартное отклонение сфер, заявленное поставщиком; D – диаметр сфер (мкм) в соответствии с указаниями поставщика. Разрешающая способность составляет не менее 10 %.

Автоматизированный метод: для некоторых счетчиков доступно программное обеспечение, предусматривающее автоматическое определение разрешающей способности. Оно может бать уже включено в измерительный прибор или использоваться совместно с микрокомпьютером, подключенным к счетчику. Использование таких автоматизированных методов будет являться надлежащим только в том случае, если поставщик представляет письменное подтверждение того, что программное обеспечение позволяет определить разрешающую способность, соответствующую результатам ручного метода, и если автоматическое определение разрешающей способности подвергается проверке по мере необходимости пользователя. Электронный метод: во время отбора образцов суспензии с частицами размерного стандарта 10 мкм регистрируется распределение выходного напряжения датчика частиц с помощью мультиканального анализатора. Для определения разрешающей способности нужно переместить курсор мультиканального анализатора вверх и вниз по шкале электрического потенциала от среднего импульсного напряжения, чтобы определить канал на каждой стороне 10-микрометрового пика, имеющего приблизительно 61 % частиц, наблюдаемых в центральном канале. Использование кривой отклика счетчика частиц для преобразования значений mV этих двух каналов в диаметр частиц определяет размер частиц в пределах одного стандартного отклонения 10-микрометрового образца. Необходимо использовать данные значения для расчета разрешающей способности, как указано в Ручном методе.

Правильность подсчета частиц – Пригодность системы

Правильность подсчета частиц прибора определяется с пользованием Метода 1 [для приборов, требующих метод калибровки путём полуколичественного подсчёта при изменяемом поле зрения (MWHC)], Метода 2 (для многоканальных приборов), или Метода 3 для любого прибора (метод ручного сравнения с ММ).

Метод 1: приборы с MWHC. Готовят суспензию и холостую пробу с использованием Стандартного образца USP Содержание частиц. Когда прибор настроен на подсчет в суммарном (общем) режиме, следует подсчитать частицы при настройках 10 мкм и 15 мкм. Суспензия и холостая проба готовятся одинаковым образом. Дегазация смеси происходит одним из трех способов: ультразвуком (при 80-120 Вт) в течение примерно 30 с, путем выдерживания или вакуумным способом. Содержимое аккуратно перемешивают путем вращения сосуда вручную или механическим способом, стараясь избегать попадания пузырьков воздуха или загрязнения. Требуется непрерывное перемешивание на протяжении всего метода. Далее извлекаются три последовательных объема непосредственно из емкости. Традиционно это объемы не менее 5 мл каждый – по причине эксплуатационных ограничений прибора и стремления максимизировать объем образца. Однако при желании можно использовать объемы, отвечающие критериям стандартизации и учитывающие чувствительность состава. Получают количество частиц и списывают данные из первой части. [ПРИМЕЧАНИЕ. Процедура должна быть завершена в течение 5 минут]. Процедура повторяется с использованием суспензии вместо холостой пробы. Из усредненных значений подсчетов, полученных в результате анализа двух частей суспензии при 10 и двух частей холостой пробы при 10, вычисляется количество частиц в каждом мл по формуле:

(PS PB)/V

PS – среднее значение количества частиц, полученное из суспензии; PB – среднее значение количества частиц, полученное из холостой пробы; V – средний объем 4 проб испытуемого образца (в мл).

Используя результаты, полученные при установке не менее 15 мкм, необходимо повторить вычисления. Пояснение: прибор с MWHC удовлетворяет требованиям к Правильности подсчета частиц, если количество, полученное при 10 мкм, и коэффициент соотношения счетчика, полученный при 10 мкм, к значению при 15, соответствуют значениям, установленным Стандартным образцом USP Содержание частиц. Если прибор не соответствует требованиям Правильности подсчета частиц, и осталось достаточно испытуемых объемов, следует повторить процедуру с ними; если объемов недостаточно, необходимо приготовить новую суспензию и холостую пробу, и повторить процедуру. Если результаты второго испытания находятся в указанных выше пределах, прибор удовлетворяет требованиям Правильности подсчета частиц. Если при второй попытке система не отвечает требованиям испытания, необходимо определить и исправить источник сбоев, и повторно испытать прибор.

Метод 2: многоканальные приборы. Используется один из трех образцов: (1) разбавление Стандартного образца USP Содержание частиц (USP PCRS); (2) серийно производимый состав калибровочных сфер номинального диаметра 15-30 мкм в суспензии, содержащей от 50 до 200 частиц/мл, сертифицированный производителем; или (3) суспензия стандартных калибровочных сфер, приготовленная в лабораторных условиях, с номинальным диаметром 15-30 мкм, содержащая от 50 до 200 частиц/мл. Использование образцов 2 и 3, отличных от USP, приемлемо, если они соответствуют критериям стандартизации USP: пять последовательных расчетов составляют не более ± 10 % от указанной концентрации. Дегазация суспензии происходит одним из трех способов: ультразвуком (при 80-120 Вт) в течение примерно 30 с, путем выдерживания или вакуумным способом. Содержимое аккуратно перемешивают путем вращения сосуда вручную или механическим способом, стараясь избегать попадания пузырьков воздуха или загрязнения. Перемешивание происходит непрерывно в течение всего испытания, и проводятся пять расчетов суспензии объемом 5 мл, используя 10-микрометровый предельный размер счетчика частиц. Получают среднее суммарное количество частиц/мл. Пояснение: прибор удовлетворяет требованиям Правильности подсчета частиц, если количество, полученное при 10 мкм, соответствует значениям, установленным для USP PCRS. Если прибор не соответствует требованиям Правильности подсчета частиц, следует повторить процедуру. Если результаты второго испытания находятся в указанных выше пределах, прибор удовлетворяет требованиям Правильности подсчета частиц. Если при второй попытке система не отвечает требованиям испытания, необходимо определить и исправить источник сбоев, и повторно испытать прибор.

Метод 3: альтернативный метод ручного измерения. Готовят суспензию стандартных калибровочных сфер номинального диаметра 15-30 мкм, содержащую от 50 до 200 частиц/мл. Дегазация суспензии происходит одним из трех способов: ультразвуком (при 80-120 Вт) в течение примерно 30 с, путем выдерживания или вакуумным способом. Содержимое аккуратно перемешивают путем вращения сосуда вручную или механическим способом, стараясь избегать попадания пузырьков воздуха или загрязнения. Перемешивание происходит непрерывно в течение всего испытания, и проводятся пять расчетов суспензии объемом 5 мл, используя 10-микрометровый предельный размер счетчика частиц. Получают среднее суммарное количество частиц/мл. Пипеткой переносят объем этой суспензии, содержащей 250-500 частиц, в фильтр-воронку, приготовленную, как описано ниже, в соответствии с Микроскопическим методом определения количества частиц, Фильтровальные установки. После сушки мембраны, подсчитывают общее количество стандартных сфер, собранных на мембранном фильтре. Это значение должно быть в пределах 20 % от среднего значения прибора на мл для суспензии. Образцы должны быть очищены в той степени, в которой уровень частиц, добавленных при испытании, оказывает незначительное влияние на его результат. Лабораторную посуду, закупоривающие устройства и другое необходимое оборудование очищают предпочтительно путем погружения и обработки предметов с использованием раствора неионогенного моющего средства. Сначала промывают в водопроводной воде, затем в отфильтрованной воде. Для облегчения очистки могут использоваться органические растворители. [ПРИМЕЧАНИЕ. Эти меры описывают один способ очистки оборудования; в ином случае, не содержащее частиц оборудование может быть получено от подходящего поставщика]. Предпочтительно, чтобы испытуемые образцы, лабораторная посуда, закупоривающие устройства и другое необходимое оборудование затем были окончательно промыты с использованием чистой отфильтрованной воды при помощи ручной аэродинамической насадки с фильтром тонкой очистки, или другим соответствующим источником отфильтрованной воды в условиях, защищенных воздушными фильтрами тонкой очистки (HEPA). В условиях HEPA при проведении испытания должна быть надета защитная одежда, не оставляющая ворсинок, и неопудренные перчатки. Испытание проводится в условиях, не способствующих возникновению значительного объема механических включений. Для подсчета частиц в холостой пробе используют очищенный сосуд такого типа и объема, который используется представителем при испытании. В сосуд вносится 50 мл (или больший объем) отфильтрованной воды, и перемешивают пробу воды в очищенной стеклопосуде путем вращения или переворачивания. [ПРИМЕЧАНИЕ. Может использоваться меньший объем, совместимый с положениями статьи]. Дегазация происходит одним из трех способов: ультразвуком (при 80-120 Вт) в течение примерно 30 с, путем выдерживания или вакуума. Для суспендирования частиц сосуд, содержащий пробу воды, вращают вручную или перемешивают механическим способом. Как указано в <788>: определяется содержание механических включений в 5 образцах отфильтрованной воды, каждая по 5 мл. Если содержание частиц размером 10 мкм или более превышает 25 для объединенных 25 мл (не более 1/мл), то предпринятые меры предосторожности недостаточны. Рекомендуется, чтобы при использовании метода испытания <789> холостая проба считалась не выдержавшей испытания, если количество частиц размером 25 мкм или более превышает 3.

Методика проведения испытания

Испытуемый препарат

Испытуемые образцы готовят в следующей последовательности. Из помещения с однонаправленным воздушным потоком, используемого для испытания, удаляются наружные закупоривающие устройства и уплотнительные ленты, но не уплотняющие изделия для укупорки. Если целостность маркировки препарата остается одной из проблем, ее удаляют или переклеивают как следует. Образцы помещают в шкаф для испытаний, и промывают наружную часть емкостей отфильтрованной водой, как указано в Условиях проведения испытаний. До испытаний емкости должны быть защищены от загрязнения окружающей среды. После соответствующего перемешивания, образец содержимого емкости открывают и вынимают (или иным другим способом) таким образом, чтобы в наименьшей степени получить частицы, способные попасть в испытуемый образец. Содержимое емкости со съемными запирающими устройствами можно вылить непосредственно после снятия укупорок. Также могут использоваться приборы для отбора образцов, имеющие иглу для проникания через закупоривающее устройство. Отбор образцов препаратов, расфасованных в гибкую пластмассовую тару, может быть осуществлен путем разрезания препарата очищенным лезвием или ножницами, или введением трубки. Сухие или лиофилизированные препараты могут быть образованы с использованием их внутреннего растворителя путем удаления укупорки для добавления растворителя или путем введения отфильтрованной воды с помощью шприца для подкожных инъекций. Если испытуемые образцы должны быть объединены, снимают крышку и переливают содержимое в чистую емкость.

Количество испытуемых образцов

USP <788> предоставляет план отбора образцов в соответствии с объемом препарата. Для всех препаратов, независимо от объема, на протяжении разработки рецептуры достигается обширный опыт в отношении целостности и стабильности партии, позволяющий применять надлежащий план отбора образцов в промышленном производстве, гарантирующий, что отбор образцов соответствует качеству партии. Все партии должны иметь план контроля качества производства по образцам продукции, учитывающий желаемые статистические показатели качества партии и облегчающий управление производственным процессом.

Определение продукта

В зависимости от испытуемой лекарственной формы, необходимо действовать в рамках соответствующей категории как указано ниже. Жидкие препараты. Объем емкости менее 25 мл: емкости готовятся в соответствии с Испытуемым препаратом. Механические включения смешиваются и суспендируются в каждой единице, путем вращения единицы в течение 20 раз. [ПРИМЕЧАНИЕ. Из-за небольшого объема некоторых препаратов может потребоваться более энергичное перемешивание раствора, чтобы должным образом суспендировать частицы]. В очищенной емкости объединяют содержимое 10 или более единиц до получения объема не менее 25 мл. Объединенный раствор дегазируют одним из трех способов: ультразвуком в течение 30 секунд, под вакуумом или позволив раствору отстояться. Содержимое емкости осторожно перемешивают вручную путем вращения или механическим способом, избегая попадания пузырьков воздуха или загрязнения. Отбирают четыре части, которые соответствуют объемам, используемым в испытании, и подсчитывают количество частиц 10 мкм и 25 мкм. Результат вычисления, полученный для первой части, не принимается во внимание. [ПРИМЕЧАНИЕ. Для малообъемных препаратов может потребоваться пул из 15 или более единиц для достижения объема пула, достаточного для четырех аликвот образцов по 5 мл. Меньшие по объему аликвоты (то есть <5 мл) могут быть использованы в том случае, если результат испытания, полученный с меньшими аликвотами, подтверждается, чтобы проанализировать результаты пригодности партии, эквивалентные тем, что получены с указанными выше аликвотами по 5 мл]. Объем емкости 25 мл или более: емкости готовятся в соответствии с Испытуемым препаратом. Механические включения смешиваются и суспендируются в каждой единице, путем вращения единицы в течение 20 раз до вскрытия емкости для дегазации. Раствор дегазируют одним из трех способов: ультразвуком в течение 30 секунд, под вакуумом или позволив раствору отстояться. При отборе образцов следует удостовериться, что проба со счетчиком размещена до середины раствора. Содержимое емкости осторожно перемешивают вручную путем вращения или механическим способом. Отбирают четыре части, каждая не менее 5 мл, и подсчитывают количество частиц 10 мкм и 25 мкм. Полученный для первой части результат не учитывается. Сухие или лиофилизированные препараты. Емкости готовятся в соответствии с Испытуемым препаратом. Избегая загрязнения, открывают каждую емкость. Действуют в соответствии с маркировкой согласно Испытуемому препарату. В зависимости от испытания используют:

Заменяют крышку, и вручную встряхивают емкость для растворения препарата. [ПРИМЕЧАНИЕ. Для некоторых сухих или лиофилизированных препаратов может возникнуть необходимость в отстаивании емкости через определенный интервал времени, после чего ее снова встряхивают до полного растворения]. После полного растворения препарата в образце, раствор дегазируют с помощью ультразвука в течение 30 секунд, под вакуумом или позволив ему отстояться. При отборе образцов следует удостовериться, что проба со счетчиком размещена до середины раствора. Для смешивания и суспендирования механических включений, содержимое единицы осторожно перемешивают вручную путем вращения емкости или механическим способом. Действуют в соответствии с указаниями для применимой единицы объема в Жидких препаратах, и подвергают анализу извлеченные как минимум 4 части, каждая не менее 5 мл, подсчитывая количество частиц 10 мкм и 25 мкм. Полученный для первой части результат не учитывается. Препараты с двойным отделением, специально разработанные для хранения лекарственного средства и растворителя в отдельных ячейках: готовят испытуемые единицы в соответствии с Испытуемым препаратом и согласно указаниям листку-вкладышу. Смешивают каждую единицу, как указано в маркировке, и взбалтывают для обеспечения тщательного смешения разных компонентов и растворения препарата. Открывают и дегазируют единицы или объединенный испытуемый образец одним из трех способов: ультразвуком в течение 30 секунд, под вакуумом или дав раствору отстояться. Действуют в соответствии с указаниями для применимой единицы объема в Жидких препаратах, присутствующие в каждой единице механические включения смешивают и суспендируют перевертыванием, вращением или при помощи механических средств. Исследуют извлеченные как минимум 4 части, каждая не менее 5 мл, подсчитывая количество частиц 10 мкм и 25 мкм. Полученный для первой части результат не учитывается. Препараты с маркировкой «Фармацевтическая многоразовая упаковка. Не предназначено для инфузий»: действуют в соответствии с указаниями для Жидких препаратов, объем которых составляет 25 мл или более. Вычисляют результат испытаний на навеске, соответствующей максимальной дозе, указанной в маркировке. Например, если общий объем многодозовой упаковки составляет 100 мл, а объем максимальной дозы 10 мл, то среднее значение количества частиц/мл будет умножено на 10, для получения результата испытаний, основанного на 10-миллилитровой максимальной дозе. [ПРИМЕЧАНИЕ. При расчете результатов испытания максимальную дозу рассматривают как эквивалент содержимого одной полной упаковки].

Вычисления при светоблокировке

Следует отметить, что предельное значение количества частиц должно отражаться для всех частиц 10 мкм и 25 мкм. Если прибор настроен на подсчет дифференциальных интервалов, таких как 10-25 мкм, 25-50 мкм, 50 мкм и т.д., то все интервалы 10 должны быть добавлены для подсчета общего количества частиц 10 мкм; для подсчета общего количества частиц 25 мкм, должны быть добавлены все интервалы 25 мкм. Например, лаборант посчитал испытуемые образцы в восьми интервалах: a) 10 - 15 мкм, b) 15 мкм - 25 мкм, c) 25 мкм - 40 мкм, d) 40 мкм - 75 мкм, e) 75мкм - 100 мкм и f) 100 мкм. Затем производится расчет P10:

P10 = P10-15мкм + P15-25мкм + P25-40мкм + P40-75мкм +

P75-100мкм + P100мкм

Объединенные образцы

Вычисляют среднее значение частиц от двух или более анализируемых аликвот. Количество частиц в каждой емкости рассчитывают по формуле:

P10VT/VAn

P25VT/VAn

P10 – среднее значение количества частиц на основании порогового значения, полученное от всех исследуемых порций при взятии образцов. P25 – среднее значение количества частиц на основании порогового значения, полученное от всех исследуемых частей 25 мкм. VT - объем объединенных образцов (в мл). VA – объем каждой исследуемой части (в мл). n – количество объединенных емкостей.

Отдельные образцы

Вычисляют среднее значение частиц, полученное для аликвот объемом 5 мл или более каждой отдельной единицы, и рассчитывают количество частиц в емкости по формуле:

P10V/VA

P25V/VA

P10 – среднее значение количества частиц на основании порогового значения, полученное от всех исследуемых порций при взятии образцов. P25 – среднее значение количества частиц на основании порогового значения, полученное от всех исследуемых частей 25 мкм. V объем испытуемой единицы (в мл). VA – объем каждой исследуемой части (в мл).

Образцы отдельной единицы

Вычисляют среднее значение частиц, полученное для аликвот объемом 5 мл или более, взятых из единицы раствора. Количество частиц в каждом мл раствора рассчитывают по формуле:

P10/V

P25/V

P10 – среднее значение количества частиц на основании порогового значения, полученное от всех исследуемых порций при взятии образцов. P25 – среднее значение количества частиц на основании порогового значения, полученное от всех исследуемых частей 25 мкм. V – объем взятой навески (в мл).

Для всех видов препарата, если испытуемое вещество было разбавлено для снижения вязкости, коэффициент разбавления должен учитываться при расчете конечного результата испытания.

Микроскопический мембранный метод определения количества частиц

Микроскопический метод определения механических включений может применяться для крупнообъемных и малообъемных инъекционных лекарственных форм, а так же для офтальмологических растворов. Данный метод помогает посчитать в основном твердые3 механические включения 10 мкм в перечисленных препаратах после отбора образца, промывки и сушки на микропористом мембранном фильтре. Так как может быть использован широкий диапазон аликвот испытуемых образцов, количество частиц может определяться на основе объема или емкости без разбавления или экстраполяции. При выполнении микроскопического мембранного анализа оценивается размер удерживаемых твердых частиц, наблюдаемых при 100-кратном увеличении, с группировкой по категориям в зависимости от их размера. В этом процессе можно столкнуться с веществами на поверхности мембраны, которые не представляются твердыми частицами, и поверхностный рельеф которых отсутствует или недостаточен, ими могут оказаться «пятна» или разрыв мембраны. Глава <788> рекомендует не пытаться классифицировать или регистрировать такие полутвердые частицы, основываясь на примечании от производителей парентеральных препаратов большого объёма после терминальной стерилизации, которые сталкивались с пятнисто-коричневыми остатками после тепловой стерилизации растворов декстрозы. Однако, если наличие такого вещества определяют не в образце углеводного раствора или в аналогичном препарате, то необходимо включить такой показатель, как робастность технологии изготовления лекарственных препаратов. Непротиворечивые доказательства таких веществ могут свидетельствовать о том, что для дальнейшего исследования в области разработки новой продукции или нового метода требуется понимание их содержания. Характер этих веществ и последующее решение об их подсчете или исследовании должны основываться на знаниях состава препарата. Анализ результатов при микроскопическом подсчете может быть дополнен испытанием образца раствора с помощью счетчика частиц светоблокировки или другим утвержденным альтернативным методом.

Прибор для испытаний описан в <788>. Дополнительные сведения:

Многоступенчатый микрометр

Шаг градуировки 25 мкм, применимый к каждому дню использования. Для первоначальной поверки используется многоступенчатый микрометр, сертифицированный Национальным институтом по стандартизации и технологии (NIST) для подтверждения установки окулярной сетки USP. После этого для повседневной поверки можно использовать промышленный микрометр, градуированный с шагом 10 мкм для проверки установки.

Фильтровальные установки

Используют подходящую для испытуемого объема фильтр-воронку, обычно имеющую внутренний диаметр около 16 мм для 25-миллиметровых мембран или около 37 мм для 47-миллиметровых мембран. Воронка изготовлена из пластмассы, стекла или нержавеющей стали. В качестве фильтрационного диффузора используют опорную перегородку фильтра из сетчатого нержавеющего фильтра или спеченного стекла. Подающее растворитель устройство способно доставлять растворители, фильтруемые через мембранный фильтр в диапазоне давлений от 10 до 80 фунт/кв. дюйм.

Мембраны

Как указано в <788>; однако выбор мелкопористого диаметра пор обеспечит более ровную поверхность, что облегчит микроскопический анализ, но и может задерживать более вязкие образцы во время испытания.

Условия проведения испытаний

Последующее изложение содержит практические рекомендации для улучшения проводимости микроскопического мембранного анализа. Наиболее подходящим будет использование двух шкафов однонаправленного воздушного потока (UAFH) или других вытяжных шкафов, один для подготовки «влажных» образцов, другой – при измерении микроскопа. Мощность UAFH достаточна для охвата площади, где проводится испытание. UAFH создает отфильтрованный воздух с помощью высокоэффективной задержки частиц, который обычно содержит не более 100 частиц (0,5 мкм или более) на кубический фут. В начале каждого цикла испытаний требуется контрольный опыт для проверки минимального воздействия окружения, применяемого оборудования и деятельности сотрудников. Каково определение цикла испытаний? Должен ли он проходить за смену, по одному на препарат каждой категории, по одному на серию фильтраций или по одному на образец? В зависимости от производственной необходимости лабораторной системы может подходить любое из вышеперечисленных определений. Способность обеспечить чистоту лабораторной посуды между образцами, количество серий испытаний различных препаратов, и объем образцов определит соответствующие механизмы контроля. Однако холостая проба представляет собой проверку пригодности системы, и если она не удастся, то все испытуемые образцы до предыдущей контрольной пробы, будут вызывать сомнения. Для фонового подсчета повторяют процесс приготовления образцов в зависимости от оборудования и мембранных типов. Собирают фильтровальную установку с чистой мембраной, промывают внутреннюю часть отфильтрованной водой, затем при применении вакуума доливают 50 мл (или больший объем) отфильтрованной воды в фильтровальную воронку, и выливают весь объем воды через мембранный фильтр. Удаляют мембрану из основания фильтр-воронки, и помещают на удерживающее приспособление, используемое для испытуемых образцов; как правило, на поверхности двусторонней клейкой ленты предметного стекла микроскопа или мембранодержателе промышленного типа, или чашке Петри. После высыхания мембраны (ее следует подсчитывать в сухом состоянии) под микроскопом изучают всю область фильтрации при увеличении 100×. Если не более 20 частиц размером 10 мкм и не более 5 частиц размером 25 мкм присутствуют в области фильтрации, фоновой уровень частиц является достаточно низким для выполнения микроскопического анализа для <788>. Если содержание частиц превышает допустимую норму, следует повторить процедуру. Важно дальнейшее допустимое значение фонового количества для испытаний <788> и <789> в соответствии с надлежащей лабораторной практикой, в частности в отношении предельного значения для 25 мкм и 50 мкм в <789>, которое следует считать более ограничительным, чем предельное значение для лекарственных форм для инъекций с учетом общего содержания частиц, допустимым (обычно) для единиц небольшого объема. Для сравнения в Таблице 1 представлено общее содержание частиц инъекционной лекарственной формы малого объёма (SVI), инъекционной лекарственной формы большого объема (LVI) и офтальмологический препарат объемом 5 мл.

Таблица 1. Сравнение общей предельной нагрузки для выбранных препаратов

Предельный размер

Фоновой подсчет

SVI,
5 мл

LVI,
125 мл

Офтальмологический препарат, 5 мл

10 мкм

20

3000 частиц

1500 частиц

250 частиц

25 мкм

5

300 частиц

250 частиц

25 частиц

50 мкм

Не определено

Нет сведений

Нет сведений

10 частиц

Таким образом, для низкого значения количества частиц в лекарственных формах меньшего объема <789> и инъекционных препаратах, лаборатория должна добиваться последовательного и меньшего количества частиц в холостой пробе – не более 5 10 мкм, не более одной 25 мкм, и ни одной 50 мкм на каждую холостую пробу. В течение всего метода работы (в условиях высокоэффективной задержки частиц) рекомендуется использовать неопудренные перчатки и одноразовую медицинскую одежду. Перед проведением испытания рабочие поверхности шкафов однонаправленного потока очищают с помощью подходящего отфильтрованного растворителя. Лабораторная посуда и оборудование должны быть последовательно промыты теплым раствором или моющим средством, не оставляющим остатка, горячей водой, отфильтрованной дистиллированной или деионизированной водой, и изопропиловым спиртом. [ПРИМЕЧАНИЕ. Перед использованием дистиллированную или деионизированную воду и изопропиловый спирт пропускают через мембранные фильтры размером 0,2 мкм или более тонким номинальным размером пор]. Выполняют ополаскивание шкафов однонаправленного воздушного потока. Перед последующими действиями лабораторная посуда и фильтровальные установки просушиваются в шкафах однонаправленного воздушного потока. Желательно, чтобы шкафы находились в отдельном помещении, куда подается отфильтрованный кондиционированный воздух, и поддерживается положительное давление относительно окружающей территории.

Подготовка микроскопа

С точки зрения успешного применения данного метода подчеркивается значение таких важных аспектов, как оптическая регулировка и светосила объектива микроскопа. Отличить 10-микрометровую частицу от 25-микрометровой частицы при 100× с отраженным светом нетрудно, однако при оборудовании с неудовлетворительными техническими характеристиками, обслуживанием или оптической регулировкой решение относительно границы каждой категории размера будет затруднено. Некорректная регулировка микроскопа так же может вызвать усталость оператора. Предстоит принимать такие подобные решения, как «Эта частица размером 9 мкм или 11 мкм?» и «Эта частица размером 24 мкм или 26 мкм?». Оптимальная разрешающая способность системы, то есть способность различать дискретные точки при минимальном разделении, опирается на хорошо выровненные оптические системы. Значительную роль в достижении качественных изображений играют такие факторы, как чистота прибора, разрешающая способность, числовая апертура объектива, фокус окуляров и окулярной шкалы. Принимая во внимание оптимизацию использования бинокулярного составного микроскопа, лучше всего воспользоваться услугами операторов, уже знакомых с этим прибором и разбирающихся в его регулировке. Осуществляющий процедуру оператор должен выровнять оптику и подсвет шкалы после получения утверждения со стороны старшего специалиста или инструктора. Рекомендуется начать с регулировки микроскопа для стандартного наблюдения в проходящем свете с использованием известного образца. Любой знакомый оператору образец будет достаточным; однако рекомендуется Стандартный образец USP Содержание частиц (USP PCRS), так как он так же применяется при методе оценки пригодности системы. Капля USP PCRS помещается между предметным стеклом микроскопа и покровным стеклом, и рассматривается под микроскопом4. При соответствующем межзрачковом расстоянии и удобном сидячем положении у микроскопа, оператор исследует поля суспендированных сфер. Следует четко определить небольшие стандартные сферы в совмещенном поле (без затруднений) для обоих глаз. После отдельной фокусной регулировки каждого предела перефокусировки окуляра для одной точки на образце достигается четкий фокус и простота изображения. Окулярную шкалу в правом окуляре микроскопа вращают таким образом, чтобы линейная шкала располагалась в нижней части области наблюдения, в результате чего окулярная шкала достигнет четкого фокуса посредством корректировки правого диоптрийного кольца окуляра при рассмотрении образца вне фокуса. Микроскоп фокусируют на образце, смотря только в правый окуляр. Затем, смотря в левый окуляр, регулируют левый диоптрий окуляра для резкой фокусировки. Если оператор неуверенно пользуется микроскопом или не достигает равноценного четкого фокуса для каждого глаза в объединенной области наблюдения, проведение подсчета превратится в трудный процесс, а результатами будут чрезмерная усталость и ошибочное сравнение размеров. Нет ничего лучше для подготовки оператора к подсчету частиц, как проверка испытуемой мембраны в качестве положительной контрольной пробы. Опытные микроскописты могут пропустить этот шаг, но для новичков или операторов, проводящих множество различных методов в современной лаборатории, изучение новой техники представляется целесообразным. Мембрана фильтра того же типа, что используется для метода, такого как содержащий частицы 25-миллиметровый цветовой контраст, 0.45-микрометрового номинального размера пор, может быть хорошим решением. Это может быть образец из предыдущего метода, содержащий множество типов частиц, или приготовленный специально для ознакомления. Эта положительная контрольная проба будет содержать природные частицы (чешуйки, изометрические частицы, различные цвета/непрозрачность, диапазон размеров и т.) для эффективного повышения восприятия оператора и облегчения регулировки микроскопа и подсвета для наилучшего контроля изображения. Одна из таких возможностей заключается в изучении подготовки мембраны, определении типового диапазона частиц, и, в первую очередь, регулировании светосилы объектива в надлежащее соответствие: 1) Под углом наклона регулируют светосилу объектива (10 ° - 20 ° в зависимости от метода) таким образом, чтобы на мембране был виден ровный эллипс или отраженный свет, и равномерное освещение, видимое через поле зрения окуляра (даже через полное поле). Тени будут свидетельствовать о крупных частицах, например с оси Z >5 мкм (ось Z - оптическая ось микроскопа). 2) Регулируют внутреннее эпископическое устройство подсвета для обеспечения равномерного освещения при максимальных настройках управления преобразователя, но более важно, чтобы при градуировке освещения наблюдались тени от более крупных частиц. Таким образом, очевидна высокая отражательная способность пробного стекла, стеклянных частиц (найти одну) и различных теней изометрических частиц (x:y:z ~ 1:1:1).

Использование диаметра круговой шкалы

Для каждого микроскопа специально разработана окулярная шкала USP. Относительная погрешность измерения используемой шкалы первоначально определяется с помощью многоступенчатого микрометра, сертифицированного Национальным институтом по стандартизации и технологии (NIST), и должна быть ± 2 %. Для этого окулярную шкалу микрометра выравнивают так, чтобы она была параллельна с многоступенчатым микрометром. Шкалы сравнивают, используя как можно большее количество делений каждой из них. Считывают количество делений окулярной шкалы (GSD), сравнивая их с делениями многоступенчатого микрометра (SMD). Относительную погрешность измерения вычисляют по формуле:

100 [(GSD SMD)/SMD]

Относительная погрешность измерения ± 2 % является приемлемой и подтверждает приемлемость регулировки, фокусирования и соответствующего оптического увеличения. После этого для подтверждения корректной настройки прибора будет достаточна проверка оператором в течение срока его использования с помощью многоступенчатого микрометра, сертифицированного NIST, или промышленного назначения. Основной метод измерения, применяемый с использованием диаметра круговой шкалы, состоит в том, чтобы подсчитать все частицы 10 мкм и более, затем классифицируя их на 10 мкм и 25 мкм. Круговая зона поля зрения окулярной шкалы является важной зоной измерения и подсчета. Частицы сопоставляются с линейной шкалой для определения их размера в эквиваленте круговой шкалы. Это осуществляется путем мысленного преобразования изображения каждой частицы в окружность, а затем сравнивая с делительными окружностями 10- и 25 мкм окулярной шкалы. Процесс определения размера выполняется без наложения частицы на делительные окружности; частицы не перемещают из их точек размещения в поле зрения окулярной шкалы (большой круг) для сравнения с делительными окружностями. Сравнивают область измеренных частиц, используя черные или прозрачные окружности. Диаметр прозрачных окружностей используют для определения размера белых и прозрачных частиц, в то время как размер тёмных частиц определяют, используя диаметр чёрных окружностей. Целью сравнения частиц с эквивалентным диаметром круговой шкалы является взаимосоответствие с определением размера частиц методом светоблокировки, для которого многие производители имеют обширные базы данных. На практике практически круглые частицы будут хорошо коррелировать с диаметром круговой шкалы. Для частиц с одной продольной осью (таких как палочки или иглы) преобразование в площадь окружности приведет к значительным систематическим погрешностям меньших вычисляемых размеров. Возможно, будет проще и традиционней подсчитывать частицы в хорде. В крайнем случае общее количество монодисперсий кристаллов тонкой иглы будет сильно зависеть от применяемого определения размера. Для правильной фокусировки окуляров микроскопа и достижения сбалансированного отдельного поля зрения каждый оператор должен довести деление шкалы USP до четкого фокуса, отрегулировав диоптрийное кольцо окуляра (это способствует «безграничному» полю зрения, или образцу вне фокуса). Затем микроскоп фокусируют на образце через этот же окуляр, после чего, смотря уже через другой окуляр, регулируют его диоптрийное кольцо для доведения до четкого фокуса образца. Окулярная шкала USP и частицы образца теперь в фокусе отрегулированного поля освещения. Подготовка фильтровальных установок и Испытуемые препараты охватываются в <788>. Далее готовят испытуемые образцы в следующей последовательности. Вне зон однонаправленного воздушного потока удаляются наружные закупоривающие устройства, уплотнительные ленты и маркировка. Промывают внешние части ёмкостей отфильтрованной водой, как указано в Условиях проведения испытаний. До испытания емкости должны быть защищены от загрязнения окружающей среды. В условиях высокоэффективной задержки частиц открывают и извлекают содержимое емкости испытуемого образца, наименьшим образом способствуя образованию частиц, которые могут попасть в испытуемый образец. Содержимое емкостей со съемными пробками можно извлечь напрямую, удалив закупоривающее устройство. Также могут использоваться приборы для отбора образцов, имеющие иглу для проникания через закупоривающее устройство. Отбор образцов препаратов, расфасованных в гибкую пластмассовую тару, может быть осуществлен путем разрезания препарата очищенным лезвием или ножницами, или введением трубки. Для всех препаратов, независимо от объема, на протяжении разработки рецептуры достигается обширный опыт в отношении целостности и стабильности партии, позволяющий применять надлежащий план отбора образцов в промышленном производстве, гарантирующий, что отбор образцов соответствует качеству партии. Все партии должны иметь план контроля качества производства по образцам продукции, учитывающий желаемые статистические показатели качества партии и облегчающий управление производственным процессом.

Определение содержания части в препарате

В зависимости от испытуемой лекарственной формы, необходимо действовать в рамках соответствующей категории как указано ниже. Жидкие препараты: тщательно смешивают испытуемые единицы, вращая не менее 20 раз. Единицы открывают таким образом, чтобы минимизировать возможное образование фоновых частиц. Препараты объемом менее 25 мл можно открывать и извлекать в фильтровальный сосуд по отдельности, или объединять содержимое 10 или более единиц в очищенной емкости. [ПРИМЕЧАНИЕ. Объединение емкостей должно быть включено в этап контрольного опыта]. Единицы единицы большого объема отфильтровывают отдельно. Единицы объемом 25 мл и более могут так же быть отфильтрованы по отдельности. Общий объем объединенного раствора или одной единицы переносят в фильтровальную воронку, и присоединяют к вакуумному насосу. Если объем фильтруемого раствора превышает объем фильтровальной воронки, раствор добавляется поэтапно до тех пор, пока весь не будет отфильтрован. Целесообразно поддерживать объем жидкости в фильтровальной воронке между повторным заполнением выше половины объема воронки, особенно если применяется частичная процедура подсчета (см. Подсчет частиц, Частичную процедуру подсчета далее). [ПРИМЕЧАНИЕ. Это необходимо для обеспечения равномерного распределения частиц на аналитической мембране]. После последнего добавления раствора начинают промывать стенки воронки, направляя поток низкого давления отфильтрованной воды вдоль стенок воронки по кругу, и прекращают промывание воронки до того, как объем опустится ниже примерно одной четверти уровня заполнения. Вакуум остается до тех пор, пока вся жидкость в воронке не уйдет. Вынимают фильтровальную воронку из фильтрационной основы, поддерживая вакуум, затем отключают вакуум, и удаляют мембрану фильтра с помощью незазубренного зажима. Помещают фильтр в предварительно подготовленный держатель, а так же маркировку с описанием пробы. Фильтру с приоткрытой крышкой дают просушиться в шкафу однонаправленного воздушного потока. Сухие или лиофилизированные препараты: емкости готовятся в соответствии с Испытуемым препаратом. Избегая загрязнения, открывают каждую емкость. Действуют в соответствии с маркировкой согласно Испытуемому препарату. В зависимости от испытания используют:

Препараты с двойным отделением, специально разработанные для хранения лекарственного средства и растворителя в отдельных ячейках: открывают каждую единицу, в достаточной степени размешивая содержимое для полного смешения отдельных компонентов, затем действуют как указано для Жидких препаратов. Фармацевтические многодозовые упаковки или упаковки лекарственных средств для многократного приёма: для препаратов с маркировкой «Фармацевтическая многоразовая упаковка. Не предназначено для инфузий» или упаковок для многократного приема действуют в соответствии с указаниями для Жидких препаратов, фильтруя общий удельный объем. Результат испытаний рассчитывают на навеске, равной указанной в маркировке максимальной дозе. Навеску рассматривают как эквивалент содержимого одной полной упаковки. Например, если общий объем многодозовой упаковки составляет 100 мл, а максимальная доза – 10 мл, то результат подсчета общего удельного объема будет умножен на 0,1 для получения результата испытаний объемной дозы 10 мл. [ПРИМЕЧАНИЕ. Для вычисления результата испытаний данная навеска будет являться эквивалентом содержимого одной полной упаковки].

Подсчет частиц

Описанный в данном разделе микроскопический метод является довольно удобным, поскольку такие обычные факторы, как воздух или несмешивающиеся жидкости, не мешают окончательному подсчету частиц. Для частичной процедуры подсчета метод обладает широким диапазоном обнаружения и определением размером. Метод используют в том случае, когда подсчитывают все частицы на поверхности аналитической мембраны или на некотором отдельном участке поверхности мембраны.

Процедура подсчета общего количества частиц

Метод определения количества частиц с помощью микроскопа может быть весьма изнурительным процессом (скучным), неточным (неудовлетворительное соответствие результатов внутри и между лабораториями), а размер частиц может быть недостоверным для несферических или изометрических форм частиц. Плохая эргономичная организация рабочего места (высота стула), несбалансированная фокусировка окуляра, чрезмерное движение глаз могут способствовать утомлению оператора. Ограничение движения глаз на окулярную шкалу определения поля, такую как шкала измерения USP, блокирует движение глаз к одной трети центрального поля зрения. Это существенно ограничивает движение глаз и, таким образом, вызывает усталость. Объем выборки является важным фактором для точности проведения подсчета. Следует проявить осторожность при отборе упаковок в рамках одной партии для наилучшего представления распределения частиц. Соответственно отобранная порция при взятии образца из индивидуальной упаковки имеет ключевое значение. Частицы могут плавать или осаждаться. Отбор только первых 25 мл парентерального раствора большого объёма или отбор без достаточного недавно проведенного смешения является ошибочным, и может привести к серьезному недоучету. Наилучшим подходом является отбор целого хорошо перемешанного содержимого упаковки с частицами во взвешенном состоянии. Подсчет изолированных частиц является одним из важных параметров. Несомненно, наилучшим подходом является подсчет всех частиц, сохраненных на мембране, и тогда единственной несложной задачей будет лишь определение правильного размера для установления пороговых значений интервалов, 10 мкм и 25 мкм. Это будет играть все более важную роль для методов, использующих дополнительные емкости для определения количества (5 мкм, 50 мкм, 100 мкм и т.д.). Следует обратить внимание, что пороговое значение размера частиц для <788> и <789> необходимо предоставлять как все частицы 10 мкм и все частицы 25 мкм. Если лабораторный метод был разработан для подсчета в нескольких интервалах (10-25 мкм, 25-50 мкм, 50 мкм и т.д.), то все интервалы 10 мкм должны быть добавлены для общего подсчета частиц 10 мкм; все интервалы 25 мкм должны учитываться для общего подсчета частиц 25 мкм. Использование близких по размеру интервалов может оказаться весьма полезным в разделении групп частиц для повышения качества препарата. При выполнении общего счета поле зрения окулярной шкалы (ПЗШ) определяется большим кругом окулярной шкалы, а вертикальная нить окуляра используется в качестве счетной сетки. Мембрану изучают по длине пути фильтрации, которая охватывают рабочую площадь фильтрации (РПФ), прилегающую, но не перекрывающую, предыдущую траекторию изучения. Повторяя процедуру, подсчитывают количество частиц как минимум в 10-25 мкм и 25 мкм пороговых значениях, перемещаясь по мембране до тех пор, пока не будут подсчитаны все частицы в пределах РПФ. Записывают общее количество частиц, которые 10-25 мкм и количество 25 мкм или больше. Для препаратов большого объема количество частиц (частицы/мл) для каждой испытуемой единицы высчитывают по формуле:

P10/V

P25/V

P10 – общее количество частиц, полученное из всех рассмотренных порций; P25 общее количество частиц, полученное из всех рассмотренных порций 25 мкм. V – объем испытуемого раствора (в мл).

Например, лаборант подсчитал испытуемые образцы в четырех интервалах: (a) 10-25 мкм, (b) 25 мкм-50 мкм, (c) 50 мкм -100 мкм и (d) 100 мкм. Затем они будут вычисляться как:

P10 = P10-25 мкм + P25-50 мкм + P50-100 мкм + P100 мкм

Для препаратов малого объема количество частиц (на каждую упаковку) рассчитывается по формуле:

P10/n

P25/n

P10 – общее количество частиц, полученное из всех рассмотренных порций; P25 – общее количество частиц, полученное из всех рассмотренных порций 25 мкм. n количество объединенных единиц (одна в случае отдельной единицы).

Частичная процедура подсчета

При столкновении с мембраной, полной частиц, задача их правильного подсчета потребует серьезных усилий. Предположим, парентеральный препарат малого объёма с предельным содержанием мелких частиц, отобранный в пул (10 флаконов), будет насчитывать на мембране 30.000 10-микрометровых частиц. Частичный или статистический подсчет на рабочей площади фильтрации мембраны может быть единственным средством достижения надежных результатов. Частичный подсчет не стоит использовать в целях сокращения времени подсчета, как просто средство оценки общей нагрузки пробы с высоким содержанием частиц. Успешно применяются такое периферийные устройства, как сетки на поверхности мембраны или окулярное поле зрения шкалы. Окулярная шкала позволяет получить резкую границу для определения области. Линии мембраны с координатной сеткой довольно широкие и имеют «чернильные пятна», которые могут быть приняты для механически включений. Какое количество навесок и как много РПФ должно быть подсчитано? С учетом 25-миллиметровых мембран РПФ имеет диаметр 16 мм при использовании стандартных фильтровальных воронок промышленного значения и, следовательно, (pi × r2) = 201 мм2. Основываясь на более ранних предложениях Ассоциации производителей теплотехнического оборудования (HIMA) и обсуждения Draftz (см. Список литературы 3) допустимые доверительные интервалы (закон распределения Пуассона, 2 стандартных отклонения) требуют, чтобы для образцов с менее чем 1000 частиц погрешность статистического подсчета была недопустима. Для таких образцов рекомендуется использовать полный подсчет. Для образцов с более чем 1000 частиц при использовании 25-миллиметровой мембраны адекватная оценка содержания частиц достигается с использованием 20 ПЗШ. Если требуется меньший доверительный интервал относительно результата, можно подсчитать большее количество полей и частиц. Для 47-миллиметровых мембран РПФ составляет 37 мм. Такие мембраны большего диаметра могут быть выбраны для препаратов, требующих большей площади поверхности мембраны (имеющие признаки медленной текучести через 25-миллиметровые мембраны), тогда РПФ = (pi × r2) = (pi × 18,5 мм2) = 1075 мм2. В этом случае для достижения соответствующей достоверности должно учитываться гораздо больше ПЗШ. Использование 100 ПЗШ для частичного подсчета 47-миллиметровых мембран обеспечивает соответствующую статистическую достоверность для подхода 20-ПЗШ/25 мм. Соответственно, при наличии 1000 или более частиц рекомендуется полный подсчет. Когда необходимо провести частичный подсчет частиц на мембране, лаборанту сначала необходимо обеспечить равномерное распределение частиц на мембране. Это оценивается путем быстрого сканирования при 50 × для качественной проверки неоднородности или скопления частиц. При наблюдаемой неоднородности необходим полный подсчет частиц на мембране. Затем подсчитывают частицы размером 10 мкм или более в одном ПЗШ по кромке площади фильтрации, а так же в центре мембраны. Количество частиц размером 10 мкм или более в ПЗШ с наибольшим количеством частиц не должно более чем в два раза превышать ПЗШ с наименьшим количеством частиц. Мембрану, не соответствующую данным критериям, подсчитывают полностью. Для выполнения частичного подсчета на мембране включают все частицы 10-25 мкм и 25 мкм в пределах ПЗШ и те, что соприкасаются с правой стороной окружности ПЗШ. Частицы вне ПЗШ не учитываются. Не учитываются и те, которые касаются левой стороны окружности ПЗШ. Разграничительная линия между правой и левой сторонами окружности ПЗШ служит вертикальной визирной линией и является полезной линией подсчета. [ПРИМЕЧАНИЕ. Следует сделать максимально возможное суждение о размере частиц без изменения положения мембраны, увеличения микроскопа или освещения]. Начинают с опорной призмы площади фильтрации и приступают к подсчету соседних ПЗШ. Когда другая кромка площади фильтрации будет достигнута, один ПЗШ перемещают в верхнюю часть фильтра и продолжают считать ПЗШ, двигаясь в противоположном направлении. Переход от одного ПЗШ к следующему может быть выполнен одним из следующих двух способов. Первый способ заключается в определении граничного значения (неоднородности частиц или поверхности в фильтре) и перемещении одного ПЗШ по отношению к нему. Второй способ подразумевает использование верньера для перемещения по 1 мм между ПЗШ. Для облегчения такого способа, позиционное управления на осях x и y регулируют до целого числа на исходном положении правоопорной призмы площади фильтрации, тогда каждое ПЗШ будет одним целым делением механизма позиционного управления оси x. Если верхняя часть площади фильтрации достигнута до достижения желаемого количества ПЗШ, начинают заново на правоопорной призме площади фильтрации на одно ПЗШ ниже, чем в первый раз. На этот раз для достижения крайней линии ПЗШ двигаются вниз по мембране. Процедуру продолжают, пока не будет завершено количество ПЗШ. Для препаратов большого объема общее количество части на мл экстраполируют по формуле:

P10AT/APV

P25 AT/APV

P10 общее количество частиц, полученное со всех полей зрения и всех предельных размеров;

P25 общее количество частиц, полученное со всех полей зрения и всех предельных размеров 25 мкм;

AT площадь фильтрации мембраны в мм2 (внутренний диаметр фильтровальной трубки);

AP часть подсчитанной площади (в мм2) с учетом числа подсчитанных полей окулярной шкалы (площадь ПЗШ × количество подсчитанных ПЗШ);

V объем фильтрованного раствора (в мл).

Для пула раствора (для единиц препарата небольшого объема, содержащих менее 25 мл) или для одной единицы препарата малого объема общее содержание частиц на одну единицу экстраполируют по формуле:

P10AT/AP n

P25 AT/AP n

P10 общее количество частиц, полученное со всех полей зрения и всех предельных размеров;

P25 общее количество частиц, полученное со всех полей зрения и всех предельных размеров 25 мкм;

n количество подсчитанных единиц (1 в случае отдельной единицы).

Для всех типов препарата, если испытуемое вещество было разбавлено для снижения вязкости, при расчете результата заключительного испытания должен учитываться коэффициент разбавления.

Список литературы


Прошедший через фильтр размером 1,2 мкм или с более мелким номинальным размером пор.

Стандарт ASTM F658-00a дает полезную информацию о методиках калибровки, применяемых однородные по размеру латексные сферы.

Так же могут возникнуть мягкие частицы и полутвердые вещества.

Объектив микроскопа требует определенной толщины покровного стекла, формально 170 мкм, или № 1 1/2.