Профили растворения in vitro двух лекарственных форм дилтиазема в таблетках и экстемпоральной лекарственной формы в капсулах: сравнительное исследование

Профили растворения in vitro двух лекарственных форм дилтиазема в таблетках и экстемпоральной лекарственной формы в капсулах: сравнительное исследование

РЕЗЮМЕ

Испытание «Растворение» обычно используется для оценки высвобождения действующего вещества из лекарственной формы для обеспечения биодоступности и эффективности. В данном исследовании мы сравнили профили растворения in vitro двух лекарственных форм дилтиазема гидрохлорида в таблетках с экстемпоральной лекарственной формой дилтиазема гидрохлорида в капсулах. Так же были исследованы масса, содержание действующего вещества, распадаемость и однородность дозирования в соответствии с монографией USP. Объём среды растворения для лопастной мешалки составлял 900 мл при скорости вращения 75 об/мин при температуре 37,0 ± 0,1 °С. Образцы объёмом 10 мл отбирали (без замены) через 15, 30, 60, 120, 180 и 210 минут после начала испытания и сразу же фильтровали с помощью шприцевых фильтров PVDF с размером пор 0,45 мкм. Затем проводили анализ образцов при помощи спектрофотометра при длине волны 237 нм. Для сравнения профилей растворения были рассчитаны коэффициент сходства (f2) и различия (f1). Содержание лекарственного средства в референтном (оригинальном), дженериковом и экстемпоральном лекарственных препаратах составляло 100,01 %, 93,17 % и 98,48 % соответственно. Все препараты показали надлежащие критерии приемлемости по однородности содержания действующего вещества (3,16, 8,37 и 4,76 для референтного, дженерикового и экстемпорального лекарственных препаратов соответственно). Дженериковый препарат показал расчетное значение f2 между 50 и 100, а значение f1 – менее 15. Вычислить значения f1 и f2 для капсул экстемпорального изготовления не представлялось возможным, поскольку они демонстрировали высвобождение действующего вещества более 85 % за 15 мин. Значения дженерикового и референтного препаратов были схожими во всех испытаниях. Более того, их профили растворения оказались аналогичными. Капсулы экстемпорального изготовления, которые быстро высвобождали действующее вещество, не отвечали требованиям не только в испытании на растворение. Необходимы дальнейшие исследования для выяснения, может ли быстрое высвобождение дилтиазема из лекарственных препаратов представлять какой-либо риск для пациентов, особенно в Бразилии, где капсулы экстемпорального изготовления назначаются наравне с оригинальным препаратом.

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: дилтиазем гидрохлорид, капсулы экстемпорального изготовления; растворение, профиль растворения in vitro.

ВВЕДЕНИЕ

При регистрации дженериковых и аналогичных лекарственных препаратов в Бразилии, помимо других требований, производитель должен предоставить свою продукцию на исследования терапевтической эквивалентности и биоэквивалентности (1, 2).

Исследования терапевтической эквивалентности проводятся для доказательства того, что два лекарственных препарата содержат одинаковые активные ингредиенты в одинаковой лекарственной форме, предназначены для одного способа введения и являются идентичными по силе действия или концентрации (действующих веществ). Для определения высвобождения действующего вещества из лекарственной формы применяются испытание на растворение и сравнительное исследование профилей растворения in vitro.

Растворение in vitro лекарственных форм с немедленным высвобождением является важным средством обеспечения качества от серии к серии. Поскольку растворение лекарственной формы играет важную роль в биодоступности лекарственных препаратов, растворение in vitro может быть использовано для прогнозирования поведения лекарственного препарата in vivo после установления корреляции in vitro - in vivo (4).

Кроме того, бразильское законодательство не требует обязательного проведения испытаний на растворение и сравнительного исследования профилей растворения in vitro для экстемпоральных лекарственных препаратов. Бразильское законодательство рекомендует проводить исследования профиля растворимости только для препаратов с узким терапевтическим индексом (5).

Дилтиазем гидрохлорид, 1,5-бензотиазепин-4(5Н)-он, 3-(ацетилокси)-5-[2- (диметиламино) этил]-2,3-дигидро-2-(4-метоксифенил)-,моногидрохлорид (рис. 1), является препаратом, широко используемым в клинической практике. Фармацевтические лекарственные формы могут быть приобретены (таблетки) или изготовлены (капсулы) в аптеках.

Капсулы дилтиазема гидрохлорида изготавливаются в той же дозировке, что и таблетки, доступные на бразильском рынке, и используются в качестве альтернативы референтному лекарственному препарату (такой подход запрещён в США). Тем не менее, были проведены исследования, сравнивающие профили растворения таблеток и капсулы экстемпорального изготовления (7, 8).

Цель данного исследования заключалась в сравнении профилей растворения in vitro таблеток дилтиазема гидрохлорида и капсул экстемпорального изготовления с применением метода определения USP растворения таблеток.

Рисунок 1. Химическая структура дилтиазема гидрохлорида

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Химические реагенты и материалы

Оборудование

ВЭЖХ-анализ проводили на системе Thermo Finnigan Surveyor System (San Jose, CA, USA), состоящей из насоса для четырёхкомпонентных смесей, дегазатора, автоматического дозатора, термостата колонок и диодно-матричного детектора. Разделение проводили на колонке Merck Millipore Purospher Star C18 (150 × 4,6 мм, размер частиц 5 мкм) при температуре 30 °C. УФ-детектирование проводили при 240 нм. Объём вводимой пробы составлял 20 мкл. В качестве подвижной фазы использовали 0,05 % (об/об) водный раствор трифторуксусной кислоты и 0,05 % (об/об) метаноловый раствор трифторуксусной кислоты (44:56, об/об) при скорости потока 1,0 мл/мин. Испытание на распадаемость проводили с помощью оборудования Nova Ética system (Vargem Grande Paulista, SP, Brazil). Испытание на растворение выполняли с помощью установки Agilent Technologies Varian VK7025 (Santa Clara, CA, USA). УФ-анализ осуществляли при помощи спектрофотометра Shimadzu UV 1800 (Kyoto, Honshu, Japan).

Сравнительный анализ таблеток и капсул экстемпорального изготовления

Две таблетки дилтиазема гидрохлорида были приобретены у дистрибьютора лекарственных средств в г. Белу-Оризонти (Бразилия). Двадцать таблеток каждого состава взвешивали по отдельности и рассчитывали однородность дозирования по массе. Содержимое двадцати капсул взвешивали по отдельности и рассчитывали однородность дозирования по массе с применением метода Бразильской фармакопеи (9). Содержание действующего вещества определяли с помощью метода ВЭЖХ, раннее разработанного и валидированного нашей группой (10). Для таблеток был взят образец из двадцати измельченных таблеток каждого состава, а для капсул – образец из содержимого двадцати капсул. Для расчёта процентного содержания дилтиазема в каждом препарате были получены и использованы среднее значение площади пика и концентрация. Количественное определение проводили в трёх повторностях. Однородность дозирования по количественному определению рассчитывали в соответствии с Бразильской фармакопеей (9) и USP (11). Для каждого состава была так же проверена распадаемость с использованием методов Бразильской фармакопеи и USP.

Растворение

Испытание выполняли по методу USP (11). Использовали воду в качестве среды растворения и аппарат II «Лопастная мешалка» (75 об/мин). Каждую таблетку или капсулу помещали в один из 6 сосудов, куда вносили 900 мл очищенной воды. Для предотвращения всплывания капсул на поверхность среды растворения было предусмотрено соответствующее грузило. Образцы анализировали при 237 нм, а в качестве холостого раствора использовали свежую среду. Для количественного определения действующего вещества использовали калибровочную кривую. Образцы объёмом 10 мл отбирали (без замены) через 15, 30, 60, 120, 180 и 210 минут после начала испытания и сразу же фильтровали с помощью шприцевых фильтров PVDF с размером пор 0,45 мкм. Образцы таблеток, отобранные через 15 и 30 минут после начала испытания, не требовали разведения. Образцы таблеток отбирали через 60, 120, 180 и 210 минут после начала испытания, а образцы капсул требовали разведения: отмеряли пипеткой 4 мл образца для разведения и доводили водой до 25 мл. В конце испытания 6 образцов каждого препарата также ввели в хроматограф с использованием ранее описанного метода для проверки стабильности лекарственного средства в условиях полного растворения. Было определено наличие/отсутствие снижения площадей пика на хроматограммах.

Приготовление стандартных растворов

Взвесили около 10 мг дилтиазема гидрохлорида и поместили в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавили 50 мл воды. Колбу поместили в ультразвуковую баню и в течение 10 мин подвергали обработке ультразвуком, после чего довели объём раствора до метки. Аликвоты исходного стандартного раствора разбавляли для получения стандартных растворов в следующих концентрациях: 2,0; 4,0; 6,0; 8,0; 10,0 и 12,0 мкг/мл. Стандартные растворы использовались для построения калибровочной кривой и, таким образом, для определения высвобождения действующего вещества в испытаниях на растворение.

Статистический анализ

Для вычисления коэффициентов сходства (f2) и различия (f1) использовали Microsoft Office Excel 2007. Коэффициент сходства рассчитывали только в том случае, если референтные или испытуемые препараты высвобождали менее 85 % действующего вещества в течение 15 минут при n = 12 (12).

РЕЗУЛЬТАТЫ

Референтный препарат имел среднюю массу 186,77 ± 1,80 мг, дженериковый препарат имел среднюю массу 145,78 ± 1,77 мг, а капсула экстемпорального изготовления имела среднюю массу содержимого 176,06 ± 4,09 мг. Содержание лекарственного средства в референтном (оригинальном), дженериковом и экстемпоральном препаратах составило 100,01 %, 93,17 % и 98,48 % соответственно. Все препараты показали надлежащие критерии приемлемости по однородности содержания действующего вещества (3,16, 8,37 и 4,76 для референтного, дженерикового и экстемпорального лекарственных препаратов соответственно). Референтные и дженериковые препараты не распадались в течение 30 мин, тогда как капсула экстемпорального изготовления распадалась в течение 5 мин.

Рисунок 2. Профили растворения референтного и дженерикового препаратов и капсулы экстемпорального изготовления

Референтный и дженериковый препараты высвобождали более 80 % дилтиазема за 3 ч, тогда как капсула экстемпорального изготовления высвобождала более 80 % дилтиазема всего за 15 мин (рис. 2). Значение f2, равное 56,60, и значение f1, равное 12,73, были получены для дженерикового препарата при сравнении с референтным препаратом. Вычислить значения f2 и f1 для экстемпорального препарата не представлялось возможным, поскольку экстемпоральная капсула высвобождала более 85 % действующего вещества за 15 мин.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Результаты определения средней массы, количественного определения, однородности дозирования и растворения оказались приемлемыми для референтного и дженерикового лекарственных препаратов. Результаты испытания капсул экстемпорального изготовления, однако, были удовлетворительными только для средней массы содержимого, количественного определения и однородности дозирования.

Таблетки обычно получают прессованием смеси действующего вещества и вспомогательных веществ, которые имеют различное действие и могут служить для обеспечения немедленного или замедленного высвобождения в зависимости от используемых вспомогательных веществ и производственных процессов. Твердые желатиновые капсулы распадаются при контакте с водой, быстро высвобождая содержимое в желудок. Для улучшения высвобождения и растворения в водной среде могут быть добавлены дезинтегранты. Капсулы могут быть изготовлены для подтверждения замедленного высвобождения с использованием покрытых оболочкой пеллет, содержащих действующее вещество (13). Поскольку испытуемые экстемпоральные капсулы не были изготовлены с использованием пеллет, они не демонстрировали замедленное высвобождение, но легко высвобождали свое содержимое в среду растворения. С другой стороны, референтный и дженериковый лекарственные препараты были изготовлены с использованием гидрогенизированного касторового масла, - вспомогательного вещества, которое обеспечивает отстроченное высвобождение действующего вещества в концентрациях 5,0-20,0 % (14). Тем не менее, важно обсудить, имеют ли наблюдаемые различия между профилями растворения экстемпоральных капсул и референтного ЛП какие-либо клинические последствия.

Ранее была представлена информация об исследованиях, сравнивающих экстемпоральные капсулы и таблетки пропранолола и преднизона (7, 8). Данные исследования сравнивали профили растворения экстемпоральных капсул с профилями растворения таблеток соответствующих референтных препаратов. Результаты показывают значительные различия между ними для обоих препаратов и согласуются с результатами, полученными в настоящем исследовании.

Таблетки дилтиазема гидрохлорида показали in vitro замедленное высвобождение, о чём свидетельствуют профили растворения. Испытание на растворение, проводимое в данном исследовании, подразумевает два периода отбора проб: через 30 мин и через 3 ч. Первый период отбора проб гарантирует, что высвобождение дилтиазема из лекарственной формы не будет быстрым, чтобы соответствовать критерию приемлемости высвобождения, составляющего менее 60 % от заявленного количества (11). Таблетки дилтиазема гидрохлорида, доступные на рынке, обеспечивают медленное высвобождение in vivo со временем достижения максимальной концентрации (Tmax) между 3 и 4 часами (15).

Исследование, проведенное Pool и коллегами (16), показало, что таблетки с немедленным высвобождением обладают той же эффективностью в условиях, приближенных к реальным, что и капсулы замедленного высвобождения для лечения стенокардии, без каких-либо различий в терапевтической эффективности (в «идеальных» условиях) или частоте возникновения нежелательных реакций. Кроме того, исследование (17) дилтиазема в качестве монотерапии для лечения артериальной гипертензии показало, что таблетки дилтиазема с немедленным высвобождением обладают хорошей эффективностью при приеме три-четыре раза в день.

Тем не менее, некоторые исследования (18–20) продемонстрировали возможный риск применения блокаторов кальциевых каналов (БКК), изготовленных в виде лекарственной формы с немедленным высвобождением для лучения артериальной гипертензии у пациентов с ишемической болезнью сердца. Лекарственные формы нифедипина с немедленным высвобождением вызывали ишемические события и увеличение числа случаев коронарной смерти при применении в больших дозах. Имеются некоторые противоречивые отчёты о нежелательных реакциях на составы с немедленным высвобождением нифедипина, дилтиазема гидрохлорида и верапамила гидрохлорида. Поэтому предпочтительно лечить артериальную гипертензию с помощью блокаторов кальциевых канальцев длительного действия или препаратов с пролонгированным высвобождением.

С октября 1992 г. по октябрь 1999 г. были проведены рандомизированные клинические исследования (21) с участием 10 881 пациентом для сравнения действия препаратов, содержащих дилтиазем, диуретики и бета-блокаторы. Результаты показывают, что дилтиазем так же эффективен, как диуретики, бета-блокаторы или их комбинация в профилактике инсульта, острого инфаркта миокарда и других осложнений со стороны сердечно-сосудистой системы. Однако авторы сообщили, что первоначально вводились лекарственные формы дилтиазема с немедленным высвобождением, а после 1997 года они были заменены препаратом с замедленным высвобождением. Авторы не представили объяснения такой замены.

Испытание на растворение таблеток дилтиазема гидрохлорида, опубликованное в 1990 году в USP XXII (22), отличается от испытания, описанного в настоящее время. Объём среды растворения составлял 900 мл воды при скорости вращения ЛМ 50 об/мин, время отбора проб – через 45 мин после начала испытания. Критерий приемлемости составлял не менее 75 % (Q) от указанного на упаковке содержания таблетки дилтиазема гидрохлорида, высвобожденного за 45 мин. В соответствии с параметрами, установленными для испытания на растворение, можно сделать вывод, что таблетки дилтиазема гидрохлорида, доступные в то время, имели немедленное высвобождение.

Однако в испытании на растворение таблеток дилтиазема гидрохлорида, опубликованном в 1995 году в USP 23 (23), имеется изменение. Объём среды растворения составлял 900 мл воды при скорости вращения ЛМ 100 об/мин, и двумя периодами отбора проб: 30 мин и 3 ч. Критерий приемлемости составлял не менее менее 60 % от указанного на упаковке содержания, растворенного за 30 минут, и не менее 80 % от указанного содержания, растворенного за 3 ч. Можно предположить, что испытание на растворение было изменено в силу преобразования состава на регулируемое высвобождение, возможно, из-за сообщений о повышенном риске сердечно-сосудистых осложнений у пациентов, принимающих таблетки БКК с немедленным высвобождением.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Дженериковый и референтный препараты выдержали все испытания. Кроме того, профили растворения дженерикового и референтного препаратов оказались схожими. Капсулы экстемпорального изготовления не выдержали только испытание на растворение. Профиль растворения капсулы экстемпорального изготовления отличался от профиля растворения референтного препарата, где капсулы быстро высвобождали действующее вещество, в то время как таблетки представляли собой механизм пролонгированного высвобождения. Таким образом, необходимо изучить, может ли применение лекарственных форм дилтиазема с немедленным высвобождением вызывать нежелательные реакции со стороны сердечно-сосудистой системы. Кроме того, назначающие препараты лица должны знать о фармакокинетических различиях и возможных рисках, связанных с использованием капсул дилтиазема экстемпорального изготовления, особенно в Бразилии, где экстемпоральные

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ