ПРОФИЛИ РАСТВОРЕНИЯ IN VITRO ДВУХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ

ФОРМ ДИЛТИАЗЕМА В ТАБЛЕТКАХ И ЭКСТЕМПОРАЛЬНОЙ

ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ В КАПСУЛАХ: СРАВНИТЕЛЬНОЕ

ИССЛЕДОВАНИЕ

РЕЗЮМЕ

Испытание «Растворение» обычно используется для оценки высвобождения

действующего вещества из лекарственной формы для обеспечения биодоступности и

эффективности. В данном исследовании мы сравнили профили растворения in vitro двух

лекарственных форм дилтиазема гидрохлорида в таблетках с экстемпоральной лекарственной

формой дилтиазема гидрохлорида в капсулах. Так же были исследованы масса, содержание

действующего вещества, распадаемость и однородность дозирования в соответствии с

монографией USP. Объём среды растворения для лопастной мешалки составлял 900 мл при

скорости вращения 75 об/мин при температуре 37,0 ± 0,1 °С. Образцы объёмом 10 мл отбирали

(без замены) через 15, 30, 60, 120, 180 и 210 минут после начала испытания и сразу же

фильтровали с помощью шприцевых фильтров PVDF с размером пор 0,45 мкм. Затем

проводили анализ образцов при помощи спектрофотометра при длине волны 237 нм. Для

сравнения профилей растворения были рассчитаны коэффициент сходства (f

) и различия (f

Содержание лекарственного средства в референтном (оригинальном), дженериковом и

экстемпоральном лекарственных препаратах составляло 100,01 %, 93,17 % и 98,48 %

соответственно. Все препараты показали надлежащие критерии приемлемости по однородности

содержания действующего вещества (3,16, 8,37 и 4,76 для референтного, дженерикового и

экстемпорального лекарственных препаратов соответственно). Дженериковый препарат показал

расчетное значение f

между 50 и 100, а значение f

– менее 15. Вычислить значения f

и f

для

капсул экстемпорального изготовления не представлялось возможным, поскольку они

демонстрировали высвобождение действующего вещества более 85 % за 15 мин. Значения

дженерикового и референтного препаратов были схожими во всех испытаниях. Более того, их

профили растворения оказались аналогичными. Капсулы экстемпорального изготовления,

которые быстро высвобождали действующее вещество, не отвечали требованиям не только в

испытании на растворение. Необходимы дальнейшие исследования для выяснения, может ли

быстрое высвобождение дилтиазема из лекарственных препаратов представлять какой-либо

риск для пациентов, особенно в Бразилии, где капсулы экстемпорального изготовления

назначаются наравне с оригинальным препаратом.

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: дилтиазем гидрохлорид, капсулы экстемпорального изготовления;

растворение, профиль растворения in vitro.

ВВЕДЕНИЕ

При регистрации дженериковых и аналогичных лекарственных препаратов в Бразилии,

помимо других требований, производитель должен предоставить свою продукцию на

исследования терапевтической эквивалентности и биоэквивалентности (1, 2).

Исследования терапевтической эквивалентности проводятся для доказательства того, что

два лекарственных препарата содержат одинаковые активные ингредиенты в одинаковой

лекарственной форме, предназначены для одного способа введения и являются идентичными по

силе действия или концентрации (действующих веществ). Для определения высвобождения

действующего вещества из лекарственной формы применяются испытание на растворение и

сравнительное исследование профилей растворения in vitro.

Растворение in vitro лекарственных форм с немедленным высвобождением является

важным средством обеспечения качества от серии к серии. Поскольку растворение

лекарственной формы играет важную роль в биодоступности лекарственных препаратов,

растворение in vitro может быть использовано для прогнозирования поведения лекарственного

препарата in vivo после установления корреляции in vitro - in vivo (4).

Кроме того, бразильское законодательство не требует обязательного проведения

испытаний на растворение и сравнительного исследования профилей растворения in vitro для

экстемпоральных лекарственных препаратов. Бразильское законодательство рекомендует

проводить исследования профиля растворимости только для препаратов с узким

терапевтическим индексом (5).

Дилтиазем гидрохлорид, 1,5-бензотиазепин-4(5Н)-он, 3-(ацетилокси)-5-[2-

(диметиламино) этил]-2,3-дигидро-2-(4-метоксифенил)-,моногидрохлорид (рис. 1), является

препаратом, широко используемым в клинической практике. Фармацевтические лекарственные

формы могут быть приобретены (таблетки) или изготовлены (капсулы) в аптеках.

Капсулы дилтиазема гидрохлорида изготавливаются в той же дозировке, что и таблетки,

доступные на бразильском рынке, и используются в качестве альтернативы референтному

лекарственному препарату (такой подход запрещён в США). Тем не менее, были проведены

исследования, сравнивающие профили растворения таблеток и капсулы экстемпорального

изготовления (7, 8).

Цель данного исследования заключалась в сравнении профилей растворения in vitro

таблеток дилтиазема гидрохлорида и капсул экстемпорального изготовления с применением

метода определения USP растворения таблеток.

Рисунок 1. Химическая структура дилтиазема гидрохлорида

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ХИМИЧЕСКИЕ РЕАГЕНТЫ И МАТЕРИАЛЫ

 Стандартный образец дилтиазема гидрохлорида (чистота 100,2 %), приобретён у

Бразильской фармакопеи (Brasília, DF, Brazil).

 Сверхчистая вода для испытаний на растворение, получена с помощью установки

обратного осмоса Gehaka OS10LXE (São Paulo, SP, Brazil).

 Сверхчистая вода для хроматографического анализа, получена с помощью системы

очистки воды Millipore (Bedford, MA, USA).

 Метанол (степень чистоты метанола соответствует требованиям ВЭЖХ), приобретён у

компании «J. T. Baker» (Phillipsburg, NJ, USA).

 Трифторуксусная кислота (степень чистоты соответствует требованиям ВЭЖХ),

приобретёна у компании «Tedia» (Fairfield, OH, USA).

ОБОРУДОВАНИЕ

ВЭЖХ-анализ проводили на системе Thermo Finnigan Surveyor System (San Jose, CA,

USA), состоящей из насоса для четырёхкомпонентных смесей, дегазатора, автоматического

дозатора, термостата колонок и диодно-матричного детектора. Разделение проводили на

колонке Merck Millipore Purospher Star C18 (150 × 4,6 мм, размер частиц 5 мкм) при температуре

30 °C. УФ-детектирование проводили при 240 нм. Объём вводимой пробы составлял 20 мкл. В

качестве подвижной фазы использовали 0,05 % (об/об) водный раствор трифторуксусной

кислоты и 0,05 % (об/об) метаноловый раствор трифторуксусной кислоты (44:56, об/об) при

скорости потока 1,0 мл/мин. Испытание на распадаемость проводили с помощью оборудования

Nova Ética system (Vargem Grande Paulista, SP, Brazil). Испытание на растворение выполняли с

помощью установки Agilent Technologies Varian VK7025 (Santa Clara, CA, USA). УФ-анализ

осуществляли при помощи спектрофотометра Shimadzu UV 1800 (Kyoto, Honshu, Japan).

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ТАБЛЕТОК И КАПСУЛ ЭКСТЕМПОРАЛЬНОГО ИЗГОТОВЛЕНИЯ

Две таблетки дилтиазема гидрохлорида были приобретены у дистрибьютора

лекарственных средств в г. Белу-Оризонти (Бразилия). Двадцать таблеток каждого состава

взвешивали по отдельности и рассчитывали однородность дозирования по массе. Содержимое

двадцати капсул взвешивали по отдельности и рассчитывали однородность дозирования по

массе с применением метода Бразильской фармакопеи (9). Содержание действующего вещества

определяли с помощью метода ВЭЖХ, раннее разработанного и валидированного нашей

группой (10). Для таблеток был взят образец из двадцати измельченных таблеток каждого

состава, а для капсул – образец из содержимого двадцати капсул. Для расчёта процентного

содержания дилтиазема в каждом препарате были получены и использованы среднее значение

площади пика и концентрация. Количественное определение проводили в трёх повторностях.

Однородность дозирования по количественному определению рассчитывали в соответствии с

Бразильской фармакопеей (9) и USP (11). Для каждого состава была так же проверена

распадаемость с использованием методов Бразильской фармакопеи и USP.

РАСТВОРЕНИЕ

Испытание выполняли по методу USP (11). Использовали воду в качестве среды

растворения и аппарат II «Лопастная мешалка» (75 об/мин). Каждую таблетку или капсулу

помещали в один из 6 сосудов, куда вносили 900 мл очищенной воды. Для предотвращения

всплывания капсул на поверхность среды растворения было предусмотрено соответствующее

грузило. Образцы анализировали при 237 нм, а в качестве холостого раствора использовали

свежую среду. Для количественного определения действующего вещества использовали

калибровочную кривую. Образцы объёмом 10 мл отбирали (без замены) через 15, 30, 60, 120,

180 и 210 минут после начала испытания и сразу же фильтровали с помощью шприцевых

фильтров PVDF с размером пор 0,45 мкм. Образцы таблеток, отобранные через 15 и 30 минут

после начала испытания, не требовали разведения. Образцы таблеток отбирали через 60, 120,

180 и 210 минут после начала испытания, а образцы капсул требовали разведения: отмеряли

пипеткой 4 мл образца для разведения и доводили водой до 25 мл. В конце испытания 6

образцов каждого препарата также ввели в хроматограф с использованием ранее описанного

метода для проверки стабильности лекарственного средства в условиях полного растворения.

Было определено наличие/отсутствие снижения площадей пика на хроматограммах.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ СТАНДАРТНЫХ РАСТВОРОВ

Взвесили около 10 мг дилтиазема гидрохлорида и поместили в мерную колбу

вместимостью 100 мл, прибавили 50 мл воды. Колбу поместили в ультразвуковую баню и в

течение 10 мин подвергали обработке ультразвуком, после чего довели объём раствора до

метки. Аликвоты исходного стандартного раствора разбавляли для получения стандартных

растворов в следующих концентрациях: 2,0; 4,0; 6,0; 8,0; 10,0 и 12,0 мкг/мл. Стандартные

растворы использовались для построения калибровочной кривой и, таким образом, для

определения высвобождения действующего вещества в испытаниях на растворение.

СТАТИСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ

Для вычисления коэффициентов сходства (f

) и различия (f

) использовали Microsoft Office

Excel 2007. Коэффициент сходства рассчитывали только в том случае, если референтные или

испытуемые препараты высвобождали менее 85 % действующего вещества в течение 15 минут

при n = 12 (12).

РЕЗУЛЬТАТЫ

Референтный препарат имел среднюю массу 186,77 ± 1,80 мг, дженериковый препарат

имел среднюю массу 145,78 ± 1,77 мг, а капсула экстемпорального изготовления имела

среднюю массу содержимого 176,06 ± 4,09 мг. Содержание лекарственного средства в

референтном (оригинальном), дженериковом и экстемпоральном препаратах составило

100,01 %, 93,17 % и 98,48 % соответственно. Все препараты показали надлежащие критерии

приемлемости по однородности содержания действующего вещества (3,16, 8,37 и 4,76 для

референтного, дженерикового и экстемпорального лекарственных препаратов соответственно).

Референтные и дженериковые препараты не распадались в течение 30 мин, тогда как капсула

экстемпорального изготовления распадалась в течение 5 мин.

Рисунок 2. Профили растворения референтного и дженерикового препаратов и капсулы

экстемпорального изготовления

Референтный и дженериковый препараты высвобождали более 80 % дилтиазема за 3 ч,

тогда как капсула экстемпорального изготовления высвобождала более 80 % дилтиазема всего

за 15 мин (рис. 2). Значение f

, равное 56,60, и значение f

, равное 12,73, были получены для

дженерикового препарата при сравнении с референтным препаратом. Вычислить значения f

для экстемпорального препарата не представлялось возможным, поскольку экстемпоральная

капсула высвобождала более 85 % действующего вещества за 15 мин.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Результаты определения средней массы, количественного определения, однородности

дозирования и растворения оказались приемлемыми для референтного и дженерикового

лекарственных препаратов. Результаты испытания капсул экстемпорального изготовления,

однако, были удовлетворительными только для средней массы содержимого, количественного

определения и однородности дозирования.

Таблетки обычно получают прессованием смеси действующего вещества и

вспомогательных веществ, которые имеют различное действие и могут служить для

обеспечения немедленного или замедленного высвобождения в зависимости от используемых

вспомогательных веществ и производственных процессов. Твердые желатиновые капсулы

распадаются при контакте с водой, быстро высвобождая содержимое в желудок. Для

улучшения высвобождения и растворения в водной среде могут быть добавлены

дезинтегранты. Капсулы могут быть изготовлены для подтверждения замедленного

высвобождения с использованием покрытых оболочкой пеллет, содержащих действующее

вещество (13). Поскольку испытуемые экстемпоральные капсулы не были изготовлены с

использованием пеллет, они не демонстрировали замедленное высвобождение, но легко

высвобождали свое содержимое в среду растворения. С другой стороны, референтный и

дженериковый лекарственные препараты были изготовлены с использованием

гидрогенизированного касторового масла, - вспомогательного вещества, которое обеспечивает

отстроченное высвобождение действующего вещества в концентрациях 5,0-20,0 % (14). Тем не

менее, важно обсудить, имеют ли наблюдаемые различия между профилями растворения

экстемпоральных капсул и референтного ЛП какие-либо клинические последствия.

Ранее была представлена информация об исследованиях, сравнивающих экстемпоральные

капсулы и таблетки пропранолола и преднизона (7, 8). Данные исследования сравнивали

профили растворения экстемпоральных капсул с профилями растворения таблеток

соответствующих референтных препаратов. Результаты показывают значительные различия

между ними для обоих препаратов и согласуются с результатами, полученными в настоящем

исследовании.

Таблетки дилтиазема гидрохлорида показали in vitro замедленное высвобождение, о чём

свидетельствуют профили растворения. Испытание на растворение, проводимое в данном

исследовании, подразумевает два периода отбора проб: через 30 мин и через 3 ч. Первый

период отбора проб гарантирует, что высвобождение дилтиазема из лекарственной формы не

будет быстрым, чтобы соответствовать критерию приемлемости высвобождения,

составляющего менее 60 % от заявленного количества (11). Таблетки дилтиазема гидрохлорида,

доступные на рынке, обеспечивают медленное высвобождение in vivo со временем достижения

максимальной концентрации (T

max

) между 3 и 4 часами (15).

Исследование, проведенное Pool и коллегами (16), показало, что таблетки с немедленным

высвобождением обладают той же эффективностью в условиях, приближенных к реальным, что

и капсулы замедленного высвобождения для лечения стенокардии, без каких-либо различий в

терапевтической эффективности (в «идеальных» условиях) или частоте возникновения

нежелательных реакций. Кроме того, исследование (17) дилтиазема в качестве монотерапии для

лечения артериальной гипертензии показало, что таблетки дилтиазема с немедленным

высвобождением обладают хорошей эффективностью при приеме три-четыре раза в день.

Тем не менее, некоторые исследования (18–20) продемонстрировали возможный риск

применения блокаторов кальциевых каналов (БКК), изготовленных в виде лекарственной

формы с немедленным высвобождением для лучения артериальной гипертензии у пациентов с

ишемической болезнью сердца. Лекарственные формы нифедипина с немедленным

высвобождением вызывали ишемические события и увеличение числа случаев коронарной

смерти при применении в больших дозах. Имеются некоторые противоречивые отчёты о

нежелательных реакциях на составы с немедленным высвобождением нифедипина, дилтиазема

гидрохлорида и верапамила гидрохлорида. Поэтому предпочтительно лечить артериальную

гипертензию с помощью блокаторов кальциевых канальцев длительного действия или

препаратов с пролонгированным высвобождением.

С октября 1992 г. по октябрь 1999 г. были проведены рандомизированные клинические

исследования (21) с участием 10 881 пациентом для сравнения действия препаратов,

содержащих дилтиазем, диуретики и бета-блокаторы. Результаты показывают, что дилтиазем

так же эффективен, как диуретики, бета-блокаторы или их комбинация в профилактике

инсульта, острого инфаркта миокарда и других осложнений со стороны сердечно-сосудистой

системы. Однако авторы сообщили, что первоначально вводились лекарственные формы

дилтиазема с немедленным высвобождением, а после 1997 года они были заменены препаратом

с замедленным высвобождением. Авторы не представили объяснения такой замены.

Испытание на растворение таблеток дилтиазема гидрохлорида, опубликованное в 1990

году в USP XXII (22), отличается от испытания, описанного в настоящее время. Объём среды

растворения составлял 900 мл воды при скорости вращения ЛМ 50 об/мин, время отбора проб –

через 45 мин после начала испытания. Критерий приемлемости составлял не менее 75 % (Q) от

указанного на упаковке содержания таблетки дилтиазема гидрохлорида, высвобожденного за 45

мин. В соответствии с параметрами, установленными для испытания на растворение, можно

сделать вывод, что таблетки дилтиазема гидрохлорида, доступные в то время, имели

немедленное высвобождение.

Однако в испытании на растворение таблеток дилтиазема гидрохлорида, опубликованном

в 1995 году в USP 23 (23), имеется изменение. Объём среды растворения составлял 900 мл воды

при скорости вращения ЛМ 100 об/мин, и двумя периодами отбора проб: 30 мин и 3 ч.

Критерий приемлемости составлял не менее менее 60 % от указанного на упаковке содержания,

растворенного за 30 минут, и не менее 80 % от указанного содержания, растворенного за 3 ч.

Можно предположить, что испытание на растворение было изменено в силу преобразования

состава на регулируемое высвобождение, возможно, из-за сообщений о повышенном риске

сердечно-сосудистых осложнений у пациентов, принимающих таблетки БКК с немедленным

высвобождением.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Дженериковый и референтный препараты выдержали все испытания. Кроме того,

профили растворения дженерикового и референтного препаратов оказались схожими. Капсулы

экстемпорального изготовления не выдержали только испытание на растворение. Профиль

растворения капсулы экстемпорального изготовления отличался от профиля растворения

референтного препарата, где капсулы быстро высвобождали действующее вещество, в то время

как таблетки представляли собой механизм пролонгированного высвобождения. Таким

образом, необходимо изучить, может ли применение лекарственных форм дилтиазема с

немедленным высвобождением вызывать нежелательные реакции со стороны сердечно-

сосудистой системы. Кроме того, назначающие препараты лица должны знать о

фармакокинетических различиях и возможных рисках, связанных с использованием капсул

дилтиазема экстемпорального изготовления, особенно в Бразилии, где экстемпоральные

8 
 
 
 
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 
1.  Law No. 9,787, of February 10, 1999—Alters Law No. 6360 of September 23, 1976,  which 
provides for health surveillance, establishes the generic medicine, provides for the use of generic 
names in pharmaceutical products, and provides other measures. Presidency of the Republic of 
Brazil:  Brasília,  1999. 
http://pesquisa.in.gov.br/imprensa/jsp/visualiza/index.jsp?jornal=1&pagina=57&data=11/02/199
9 (accessed Mar 20, 2017).  
2.  RDC Resolution No .133/2003, of May 29, 2003–Provides for registration of similar medications 
and provides other measures. Brazilian Health Surveillance Agency (ANVISA): Brasília, 2003. 
http://pesquisa.in.gov.br/imprensa/jsp/visualiza/index.jsp?jornal=1&pagina=25&data=02/06/200
3 (accessed Mar 20, 2017).  
3.  Biofarmacotécnica,  1st  ed.;  Storpirtis,  S.,  Gonçalves,  J.  E.,  Chiann,  C.,  Gai,  M.  N.,  Eds.; 
Guanabara Koogan: Rio de Janeiro, 2011.  
4.  Marroum, P. J. History and Evolution of the Dissolution Test. Dissolution Technol. 2014, 21 (3), 
11–16. DOI: 10.14227/ DT210314P11.  
5.  Good  Handling  Practices  of  Compounded  and  Officinal  Preparations  for  Human  Use  in 
Compounding Pharmacies—RDC n.67/2007. Brazilian Health Surveillance Agency (ANVISA): 
city?,  2007.  http://pesquisa.in.gov.br/imprensa/jsp/visualiza/index. 
jsp?jornal=1&pagina=29&data=09/10/2007 (accessed Mar 20, 2017).  
6.  Drug Quality and Security Act. Public Law 113–54; Code of Federal Regulations, 127 Stat. 587, 
2013.  https://www.congress.gov/113/plaws/publ54/PLAW-113publ54.pdf  (accessed  Aug  31, 
2016).  
7.  Barancelli,  R.;  Ferreira,  J.  R.  N.  Avaliação  físico-química  de  cápsulas  manipuladas  de 
prednisona  no  município  de  Erechim,  RS.  Evidência  2007,  7  (1),  51–62. 
http://editora.unoesc.edu.br/ index.php/evidencia/article/view/1860/932 (accessed Mar 20, 2017)  
8.  Júnior, F. P.; Escarrone, A. L. V. E.; Bittencourt, C. F.; Santos, M. R.; Laporta, L. V. Perfis de 
dissolução  comparativos  entre  cápsulas  manipuladas  de  cloridrato  de  propranolol  e  o 
medicamento  referência.  Disciplinarum  Scientia  2005,  6  (1),  35–43.                                              
http://sites.unifra.br/Portals/36/CSAUDE/2005/perfil-F.pdf (accessed Sep 9, 2016).  
9.  Brazilian Pharmacopeia, 5th ed.; Brazilian Health Surveillance Agency: Brasília, 2010.  
10. Souza, M. A. C.; Pianetti, G. A.; Nogueira, F. H. A. Development of an analytical method for 
determination of diltiazem in solid dosage forms.. Proceedings of the Brazilian Symposium on 
Chromatography and Related Techniques, Campos do Jordão, SP, Brazil, September 4–6, 2014.  
11. The United States Pharmacopeia and National Formulary USP 36–NF 31; The United States 
Pharmacopeial Convention, Inc.: Rockville, MD, 2013.  
12. Stuart,  A.  V.;  Clement,  Y.;  Sealy,  P.;  Löbenberg,  R.;  Montane-  Jalme,  L.;  Maharaj,  R.  G.; 
Maxwell, A. Comparing the Dissolution Profiles of Seven Metformin Formulations in Simulated 
Intestinal Fluid. Dissolution Technol. 2015, 22 (1), 17–21. DOI: 10.14227/DT220115P17.  
13. Allen, L. V., Jr.; Popovich, N. G.; Ansel, H. C. Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug 
Delivery Systems; Lippincott Williams & Wilkins: Baltimore, MD, 2007.  

14. Handbook of Pharmaceutical Excipients, 6th ed.; Rowe, R. C., Sheskey, P. J., Quinn, M. E.,

Eds.; Pharmaceutical Press: London, 2009.

15. Sweetman, S. C., Ed. Martindale, the Complete Drug Reference, 36th ed.; Pharmaceutical Press:

London, 2009; p 1265.

16. Pool, P. E.; Thadani, U.; Miller, A. B.; Fromell, G. J.; Eff, J. Conversion from immediate-release

to extended-release diltiazem in angina pectoris. Clin. Cardiol. 1994, 17 (9), 484–488. DOI:

10.1002/ clc.4960170905.

17. Pool, P. E.; Nappi, J. M.; Weber, M. A. Antihypertensive monotherapy with tablet (Prompt-

release) diltiazem: Multicenter controlled trials. Cardiovasc. Drugs Ther. 1990, 4 (4), 1089–

1096. DOI: 10.1007/BF01856504.

18. AHFS Drug Information; McEvoy, G. K., Ed.; American Society of Healthy-System

Pharmacists: Bethesda, MD, 2004.

19. The Sixth Report of the Joint National Committee on Prevention, Detection, Evaluation, and

Treatment of High Blood Pressure. Arch. Intern. Med. 1997, 157 (21), 2413-2446. DOI:

10.1001/archinte.1997.00440420033005.

20. Sociedade Brasileira de Cardiologia; Sociedade Brasileira de Hipertensão; Sociedade Brasileira

de Nefrologia. VI Brazilian Hypertension Guidelines. Arq. Bras. Cardiol. 2010, 95 (1, Suppl. 1),

1–51. DOI: 10.1590/S0066-782X2010001700001.

21. Hansson, L.; Hedner, T.; Lund-Johansen, P.; Kjeldsen, S. E.; Lindholm, L. H.; Syvertsen, J. O;

Lanke, J.; de Faire, U.; Dahlöf, B.; Karlberg, B. E. Randomised trial of effects of calcium

antagonists compared with diuretics and β-blockers on cardiovascular morbidity and mortality in

hypertension: the Nordic Diltiazem (NORDIL) study. Lancet 2000, 356 (9227), 359–365. DOI:

10.1016/S0140-6736(00)02526-5.

22. The United States Pharmacopeia and National Formulary USP XXII–NF XVII; The United

States Pharmacopeial Convention, Inc.: Rockville, MD, 1990.

23. The United States Pharmacopeia and National Formulary USP 23–NF 18; The United States

Pharmacopeial Convention, Inc.: Rockville, MD, 1995.